[發(fā)明專利]運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911076704.6 | 申請日： | 2019-11-06 |
| 公開（公告）號： | CN110777167B | 公開（公告）日： | 2021-07-06 |
| 發(fā)明（設計）人： | 蔣曉玲;劉麗;鄭曉寧;劉華圳 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣州市婦女兒童醫(yī)療中心 |
| 主分類號： | C12N15/90 | 分類號： | C12N15/90;C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 廣州華進聯(lián)合專利商標代理有限公司 44224 | 代理人： | 林青中 |
| 地址： | 510000 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 運動 功能障礙 表型 gtpch 缺陷 小鼠 模型 構(gòu)建 方法 | ||
1.一種運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的構(gòu)建方法包括：
(1)獲取Gch1 p.Leu108Arg雜合子突變小鼠，所述雜合子突變小鼠的Gch1基因編碼蛋白第108位的亮氨酸突變?yōu)榫彼幔?/p>
(2)將所述雜合子突變小鼠與其他品系的野生型小鼠進行雜交，篩選F1代雜合子突變小鼠；
(3)所述F1代雜合子突變小鼠自交，篩選F2代純合子突變小鼠。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述Gch1 p.Leu108Arg雜合子突變小鼠源自C57BL/6品系小鼠。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述其他品系的野生型小鼠為DBA/2品系野生型小鼠。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述其他品系的野生型小鼠為129Sv品系野生型小鼠。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項所述的運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述Gch1 p.Leu108Arg雜合子突變小鼠的構(gòu)建方法包括：
1)針對小鼠Gch1基因設計sgRNA和點突變寡核苷酸模板ssDNA；
2)將Cas9 mRNA和所述sgRNA及點突變ssDNA注射入小鼠受精卵，移植代孕。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述sgRNA的序列如SEQ ID No.1所示。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述點突變寡核苷酸模板ssDNA的序列如SEQ ID No.2所示。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，移植代孕所得首建鼠的鑒定采用PCR測序，所述PCR測序的引物如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項所述的運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述突變小鼠的鑒定采用PCR測序，所述PCR測序的引物如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項所述的運動功能障礙表型GTPCH酶缺陷病小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述突變小鼠的鑒定采用PCR-RFLP；所述PCR-RFLP的引物如SEQ IDNo.5和SEQ ID No.6所示。
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