[發(fā)明專利]一種檢測骨結核標本中環(huán)絲氨酸濃度的方法

有效

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• 申請日: 2019-11-04
• 公開（公告）號: CN110824039B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設計）人: 黃海榮;于霞;文舒安;張婷婷;姜廣路
• 申請（專利權）人: 北京市結核病胸部腫瘤研究所;首都醫(yī)科大學附屬北京胸科醫(yī)院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N1/28;G01N1/42
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發(fā)明公開了一種檢測骨結核標本中環(huán)絲氨酸濃度的方法。它包括如下步驟：(1)將骨結核標本用液氮冷凍，液氮揮發(fā)后，加入溶劑研磨并進行環(huán)絲氨酸提取，收集組織提取液；(2)對組織提取液和環(huán)絲氨酸標準溶液采用高效液相色譜?質譜聯(lián)用進行檢測；測定時，如組織提取液色譜峰的保留時間與環(huán)絲氨酸標準溶液一致，并在扣除背景后的樣品質譜中，所選擇的定性離子均出現，且豐度與環(huán)絲氨酸標準溶液的離子豐度比相一致，判定環(huán)絲氨酸檢出；(3)根據步驟(2)得到的高效液相色譜?質譜聯(lián)用測定的組織提取液的數據，采用內標法對骨結核標本中的環(huán)絲氨酸的含量進行定量分析，即得到骨結核標本中環(huán)絲氨酸濃度。本發(fā)明縮短了骨標本處理的時間，測定濃度準確。

技術領域

本發(fā)明涉及一種檢測骨結核標本中環(huán)絲氨酸濃度的方法，屬于藥物檢測領域。

背景技術

骨結核是由結核桿菌侵入骨或關節(jié)而引起的破壞性病變。發(fā)病部位多數在負重大、活動多、容易發(fā)生勞損的骨或關節(jié)。最好發(fā)病部位是脊柱，其次是髖、膝、足、肘、手等。

目前，各研究中從骨組織中檢測藥物濃度的處理方法大多為-50℃下冷凍干燥，稱其質量后迅速研磨成粉，再稱其所需要的重量。最后根據測得的藥物濃度，依據骨勻漿稀釋比、組織的干濕質量比兩次換算并減去骨樣本中的血污染后求得組織樣本中藥物的實際濃度。

由于冷凍干燥所需的時間相對較長，且兩次稱重會進一步加大誤差。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測骨結核標本中環(huán)絲氨酸濃度的方法，本發(fā)明縮短了骨標本處理的時間，省去了組織干濕質量比的換算，測定濃度更準確。

本發(fā)明提供了一種檢測骨結核標本中環(huán)絲氨酸濃度的方法，包括如下步驟：(1)將骨結核標本先用液氮冷凍，等液氮揮發(fā)后，加入溶劑研磨并進行環(huán)絲氨酸提取，收集組織提取液；

(2)對所述組織提取液和環(huán)絲氨酸標準溶液采用高效液相色譜-質譜聯(lián)用進行檢測；測定時，如所述組織提取液色譜峰的保留時間與所述環(huán)絲氨酸標準溶液一致，并在扣除背景后的樣品質譜中，所選擇的定性離子均出現，且豐度與所述環(huán)絲氨酸標準溶液的離子豐度比相一致，判定環(huán)絲氨酸檢出；

(3)根據步驟(2)得到的所述高效液相色譜-質譜聯(lián)用測定的所述組織提取液的數據，采用內標法對所述骨結核標本中的環(huán)絲氨酸的含量進行定量分析，即得到骨結核標本中環(huán)絲氨酸濃度。

上述的方法中，所述溶劑為水，具體可為HPLC級別純水；

采用陶瓷珠進行所述研磨；

所述提取在勻漿條件下進行。

上述的方法中，步驟(1)中還包括對所述骨結核標本進行如下處理的步驟：用生理鹽水沖去附著血液，用濾紙擦干殘液和附著組織，勻漿前先將骨結核標本用液氮冷凍，等液氮揮發(fā)后，加入溶劑研磨；

所述研磨的條件：速率為6m/s，100s間歇1min，重復一次；

所述提取的過程如下：4℃放置5h，其間每1小時間斷渦旋：6m/s速度渦旋20s；然后4℃離心10min，收集上清。

上述的方法中，所述高效液相色譜-質譜聯(lián)用的檢測條件如下：a)進樣體積：2μL；

b)色譜柱：液相色譜柱：ZORBAX SB-Aq，2.1×50mm，3.5Micron，具體可為PN871700-914；

c)流動相：A相為5mM甲酸胺水溶液，B相為含體積百分比0.1％甲酸的甲醇溶液；

d)梯度程序：采用等度洗脫，流動相A相體積分數為85％、B相體積分數為15％，停止時間4min；

e)流速：0.3mL/min；

f)離子源：電噴霧離子源-正離子模式；