[發(fā)明專利]ATP熒光檢測試劑

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911043199.5
• 申請日: 2019-10-30
• 公開（公告）號: CN110607347A
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李書紅;陳楊青;夏放;蔣曉東
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江東鴻生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26;G01N21/64
• 代理公司: 44289 深圳市中原力和專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 胡國良

本發(fā)明提供了一種ATP熒光檢測試劑，所述ATP熒光檢測試劑，在酶反應(yīng)基本溶液體系和緩沖體系中加入用于提高所述酶反應(yīng)基本溶液體系中的熒光素酶熱穩(wěn)定性的保護劑，所述保護劑包含特定濃度的海藻糖和甜菜堿。與相關(guān)技術(shù)相比，本發(fā)明提供的ATP熒光檢測試劑的熱穩(wěn)定性更佳且保存時間明顯延長。

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及ATP熒光檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種室溫穩(wěn)定的ATP熒光檢測試劑。

【背景技術(shù)】

螢光素酶在有ATP(adenosine triphosphate，腺嘌呤核苷三磷酸)情況下，氧化熒光素并放出熒光，發(fā)出的光子可以被光敏感元件，如螢光探測器或改進后的光學(xué)顯微鏡探測到。

熒光素酶熱穩(wěn)定性很差，在室溫下很快就失去活性。提高熒光素酶的熱穩(wěn)定性一方面可以通過改變其基因結(jié)構(gòu)(基因突變)來進行。但是這種方法過程繁瑣，而且許多可以改變其熱穩(wěn)定性的突變都已被專利保護。另一種方法是加入特定保護劑來提高熒光素酶的穩(wěn)定性。

雖然市售的各種ATP熒光檢測試劑均在一定程度提高了溶液態(tài)試劑的熱穩(wěn)定性，但試劑的保存期及熱穩(wěn)定性還不夠令人滿意。

因此，有必要提供一種新的ATP熒光檢測試劑來解決上述問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的目的是克服上述技術(shù)問題，提供一種熱穩(wěn)定性佳的ATP熒光檢測試劑，解決現(xiàn)有市售ATP熒光測試劑熱穩(wěn)定性差，保存時間短的問題。

本發(fā)明提供一種ATP熒光檢測試劑，在酶反應(yīng)基本溶液體系和緩沖體系中加入用于提高所述酶反應(yīng)基本溶液體系中的熒光素酶熱穩(wěn)定性的保護劑，所述保護劑包括海藻糖和甜菜堿，所述甜菜堿的濃度為0.18-0.36M，所述海藻糖的濃度為0.62-1.24M的甜菜堿。

優(yōu)選的，所述ATP熒光檢測試劑由酶反應(yīng)基本溶液體系、緩沖體系及保護劑組成。

優(yōu)選的，所述緩沖體系為三甲基甘氨酸緩沖溶液，所述三甲基甘氨酸緩沖溶液的濃度為0.1M。

優(yōu)選的，所述酶反應(yīng)基本溶液體系包括熒光素酶、熒光素和金屬離子，所述熒光素酶優(yōu)選為蟲熒光素酶，所述熒光素優(yōu)選為D-蟲熒光素鉀鹽，所述蟲熒光素酶和D-蟲熒光素鉀鹽的濃度分別優(yōu)選為10mg/L和500mg/L，所述金屬離子為Mg²⁺，所述金屬離子Mg²⁺的濃度優(yōu)選為15mM。

優(yōu)選的，所述ATP熒光檢測試劑還包括牛血清白蛋白和二硫蘇糖醇，其中所述牛血清白蛋白的濃度優(yōu)選為0.05％-0.1％，所述二硫蘇糖醇的濃度優(yōu)選為0.01％-0.05％。

與相關(guān)技術(shù)相比，本發(fā)明提供的ATP熒光檢測試劑加入了具有特定比例海藻糖和甜菜堿的保護劑，其中，甜菜堿有效防止脫水誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)熱動力學(xué)干擾，海藻糖和甜菜堿這兩種組分極大提高了ATP熒光檢測劑的熱穩(wěn)定性，同時也使ATP檢測試劑的保存時間顯著延長。

【附圖說明】

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖，其中：

圖1為25℃條件下僅添加海藻糖與不添加甜菜堿和海藻糖的ATP熒光檢測試劑的熒光值曲線圖；

圖2為25℃條件下僅添加甜菜堿與不添加甜菜堿和海藻糖的ATP熒光檢測試劑的熒光值曲線圖；

圖3為25℃條件下同時添加海藻糖與甜菜堿與不添加甜菜堿和海藻糖的ATP熒光檢測試劑的熒光值曲線圖；

圖4為35℃條件下ATP熒光檢測試劑中分別添加不同用量的海藻糖和甜菜堿的熒光值曲線圖。

【具體實施方式】