[發明專利]一種真菌來源的重組巖藻糖特異性凝集素r-AofleA及其表達菌株和應用

在審

• 申請號: 201911035324.8
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110903362A
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 王永中;田東蕊;張麗;孔小衛;盛康亮;汪靜敏;張敏
• 申請（專利權）人: 安徽大學
• 主分類號: C07K14/37
• 分類號: C07K14/37;C12N15/31;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;G01N33/574;C12R1/19
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司 34101
• 代理人: 喬恒婷

本發明公開了一種真菌來源的重組巖藻糖特異性凝集素r?AofleA及其表達菌株和應用，其中真菌來源的重組巖藻糖特異性凝集素r?AofleA具有下列氨基酸序列之一：(1)序列表中的SEQ ID No：1；(2)序列表中的SEQ ID No：1經取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸殘基且編碼相同功能蛋白質的氨基酸序列；(3)與序列表中的SEQ ID No：1具有80％以上同源性的突變氨基酸序列。本發明重組巖藻糖特異性凝集素r?AofleA對游離巖藻糖具有強的結合親和力，其解離常數Kd值為0.015μM，在糖芯片上大于等于0.1μg/ml濃度即顯示結合信號，適用于AFP?L3％的檢測。

技術領域

本發明屬于分子生物學和基因工程領域，具體涉及一種真菌來源的重組巖藻糖特異性凝集素r-AofleA及其表達菌株和應用。

背景技術

N-聚糖的巖藻糖基化是整個真核生物界常見的一種分子修飾現象，在多種細胞的生理病理進程中起重要作用，包括信號傳導、細胞粘附、受精和細胞生長等等(Aplin&Jones,2012；Becker&Lowe,2003；Ma,Simala-Grant,&Taylor,2006)。N-聚糖的巖藻糖基化種類比較復雜，包括不同種類的糖苷鍵以及不同數量的巖藻糖殘基，這些變化取決于生物體以及細胞的生理與病理狀態(Vainauskas et al.,2016)。例如，以α-1,6-糖苷鍵連接的巖藻糖殘基經常在N-聚糖的核心殼聚二糖最內部的GlcNAc殘基上出現，稱為“核心”巖藻糖；而大部分巖藻糖以α1,2-，α1,3-或α1,4-糖苷鍵與半乳糖殘基連接，存在于N-聚糖的外臂上(Vainauskas et al.,2016)。研究表明，在多種不同的病理狀態下，例如肝細胞癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌和結腸直腸癌中，可以觀察到核心巖藻糖基化水平的顯著改變(Holst,Wuhrer,&Rombouts,2015；Mehta,Herrera,&Block,2015；Takahashi et al.,2016)。以肝癌為例，臨床證據表明，與其他肝臟疾病比較，肝細胞癌(HCC)產生一種核心巖藻糖基化的甲胎蛋白異質體(AFP-L3)。相應地，患者血液中的巖藻糖基化指數(AFP-L3％)升高。AFP-L3是一類對LCA凝集素具有高結合親和力的AFP組分，已經成為HCC臨床診斷的分子標志物之一(Choi et al.,2013；Huang,Shyu,Turner,Chen,&Chen,2013；Li,Mallory,&Satomura,2001)。因此，檢測臨床樣品中N-聚糖巖藻糖基化的改變水平具有重要的理論和臨床意義，可以作為某些疾病(如肝細胞癌)潛在的診斷手段和預后指標(Zhang et al.,2016)。

目前，凝集素是檢測巖藻糖基化程度的主要分子探針，它們可以識別核心巖藻糖基化和外臂巖藻糖基化，可以對各種細胞生理病理過程中(如肝細胞癌)巖藻糖基化進行高度特異性檢測和定量測定(Vainauskas et al.,2016)。迄今為止，已經有若干種凝集素在科研中或臨床上得到了初步應用，例如使用真菌凝集素AAL和植物凝集素LCA來檢測血清巖藻糖基水平用于肝細胞癌的診斷。雖然如此，由于巖藻糖基化與臨床上各種疾病的緊密相關性，開發新的巖藻糖特異性凝集素，使其可以識別不同聚糖的巖藻糖鍵，尤其是可以識別N-聚糖中的核心巖藻糖基化，仍然是科研與臨床上亟需的。開發這些具有不同巖藻糖結合特性的新型凝集素，將構成新的分子探針工具箱，利用這些新的分子探針可以更好地了解真核生物細胞內核心N-聚糖巖藻糖基化的生物學功能，或者用于篩選或檢測針對特定疾病的聚糖類或糖蛋白類生物標記物(Vainauskas et al.,2016)。

發明內容

本發明旨在提供一種真菌來源的重組巖藻糖特異性凝集素r-AofleA及其表達菌株和應用。