[發明專利]用于檢測核酸PAP擴增的焦磷酸化激活性熒光

在審

• 申請號: 201911035316.3
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN111172245A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 丁少峰;劉強
• 申請（專利權）人: 丁少峰;劉強
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 曹玉平

1.一種用于焦磷酸化激活性聚合反應中擴增模板的3'末端阻斷性引物，其內部區域或5'末端核苷酸上帶有熒光基團以及3'末端阻斷性核苷酸上帶有淬滅基團，一旦焦磷酸化反應去除了與淬滅基團連接的3'末端阻斷性核苷酸，在PAP擴增中的熒光基團即產生可檢測到的熒光信號。

2.根據權利要求1所述的用于焦磷酸化激活性聚合反應的3'末端阻斷性引物，其特征在于，FAM或HEX熒光基團連接在內部區域或5'末端核苷酸上，而TAMRA淬滅基團連接在3'末端雙脫氧核苷酸上。

3.根據權利要求1所述的用于焦磷酸化激活性聚合反應的3'末端阻斷性引物，其特征在于，所述熒光基團的發射光譜與淬滅基團的吸收光譜重疊。

4.根據權利要求1所述的用于焦磷酸化激活性聚合反應的3'末端阻斷性引物，其中熒光基團的位置為從3'末端起的30個堿基或更少。

5.一種用于焦磷酸化激活性聚合反應中擴增模板的3'末端阻斷性引物，其內部區域或5'末端核苷酸上帶有淬滅基團以及3'末端阻斷性核苷酸上帶有熒光基團，一旦焦磷酸化反應去除了與淬滅基團連接的3'末端阻斷性核苷酸，在PAP擴增中的熒光基團即產生可檢測到的熒光信號。

6.根據權利要求5所述的用于焦磷酸化激活性聚合反應的3'末端阻斷性引物，其特征在于，TAMRA淬滅基團連接在內部區域或5'末端核苷酸上，而FAM或HEX熒光基團連接在3'末端雙脫氧核苷酸上。

7.根據權利要求5所述的用于焦磷酸化激活性聚合反應的3'末端阻斷性引物，其特征在于，所述熒光基團的發射光譜與淬滅基團的吸收光譜重疊。

8.根據權利要求5所述的用于焦磷酸化激活性聚合反應的3'末端阻斷性引物，其特征在于，所述淬滅基團的位置為從3'末端起的30個堿基或更少。

9.多個3'末端阻斷性引物用于多重焦磷酸化激活性聚合反應以擴增在一個反應中的多個模板，包括：

a)用于擴增第一模板的第一阻斷性引物，其內部區域或5'末端核苷酸上帶有第一熒光基團以及3'末端阻斷性核苷酸上帶有一種通用淬滅基團，一旦焦磷酸化反應去除了與淬滅基團連接的3'末端阻斷性核苷酸，在PAP擴增中的第一熒光基團即產生可檢測到的熒光信號；和

b)用于擴增第二模板的第二阻斷性引物，其內部區域或5'末端核苷酸上帶有第二熒光基團以及3'末端阻斷性核苷酸上帶有相同的通用淬滅基團，一旦焦磷酸化反應去除了與相同的通用淬滅基團連接的3'末端阻斷性核苷酸，在PAP擴增中的第二熒光基團即產生可檢測到的熒光信號。

10.根據權利要求9所述的用于多重焦磷酸化激活性聚合反應的多個3'末端阻斷性引物，其特征在于所述第一阻斷性引物的FAM熒光基團連接到內部區域或5'末端核苷酸上，而通用的TAMRA淬滅基團連接到3'末端雙脫氧核苷酸上，其中第二阻斷性引物的HEX熒光基團連接到內部區域或5'末端核苷酸上，相同的通用TAMRA淬滅基團則連接到3'末端雙脫氧核苷酸上。

11.根據權利要求9所述的用于多重焦磷酸化激活性聚合反應的多個3'末端阻斷性引物，其特征在于所述第一阻斷性引物上帶有與第二阻斷性引物相同的通用淬滅基團，但是第一阻斷性引物上帶有與第二阻斷性引物不同的熒光基團。

12.根據權利要求9所述的用于多重焦磷酸化激活性聚合反應的多個3'末端阻斷性引物，其特征在于所述第一模板是內部對照，第二模板是靶標。

13.根據權利要求9所述的用于多重焦磷酸化激活性聚合反應的多個3'末端阻斷性引物，其特征在于所述每個熒光基團的發射光譜與通用淬滅基團的吸收光譜重疊。