[發(fā)明專利]一種高穩(wěn)定性的磺胺類藥物抗體hAb 4D11及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911032100.1
• 申請日: 2019-10-28
• 公開（公告）號: CN112724256B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王戰(zhàn)輝;沈建忠;溫凱;于雪芝;江海洋;李成龍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;G01N33/53
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

本發(fā)明涉及生物技術(shù)和免疫檢測領(lǐng)域，具體涉及一種高穩(wěn)定性的磺胺類藥物抗體hAb 4D11及其應(yīng)用。所述的抗體hAb 4D11包括重鏈及輕鏈，所述重鏈是對SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列進行特定位點的氨基酸殘基置換所得到的；所述輕鏈是對SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列進行特定位點的氨基酸殘基置換所得到的。本發(fā)明中的抗體hAb 4D11在識別磺胺類藥物的性能并未改變的情況下，同時具有耐熱性和耐有機溶劑性，而且，該抗體還具有較為廣泛的識別范圍。利用本發(fā)明提供的重組抗體hAb 4D11，在樣本前處理時無需氮吹、復(fù)溶，僅需提取后稀釋，便可用于檢測，有利于縮短檢測時間，提高檢測效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)和免疫檢測領(lǐng)域，具體涉及一種高穩(wěn)定性的磺胺類藥物抗體hAb 4D11及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

磺胺類藥物(sulfonamides,SAs)是一類抗菌譜較廣、價格低廉、種類較多的化學合成抗菌劑，目前廣泛用于獸醫(yī)臨床、畜牧和水產(chǎn)養(yǎng)殖中，來預(yù)防和治療細菌感染性疾病。但其不合理使用甚至濫用，易造成SAs在動物源食品中殘留，繼而威脅人類健康和食品安全。除了從源頭上控制SAs的不合理使用外，對動物源食品中的藥物殘留進行檢測及監(jiān)控，是保障食品安全的重要措施。因此有必要建立簡便、快速、靈敏、廣譜的殘留檢測方法。

目前，SAs殘留的檢測主要使用色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)的理化分析方法。而該方法需要的儀器較為昂貴、樣品前處理較為復(fù)雜、人員及操作較為專業(yè)，繁瑣費時、檢測成本較高，且不能現(xiàn)場操作，不適于大批量樣本的快速篩查。

以抗原和抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的免疫分析技術(shù)，具有速度快、成本低、靈敏度高的特點，目前被新修訂的《食品安全法》認可，并被廣泛用于動物源食品中SAs的快速篩查。

通過小鼠免疫、脾細胞與瘤細胞融合、單克隆篩選，制備獲得的單克隆抗體(mAb)，通常其對有機溶劑的耐受性能和熱穩(wěn)定性較差。而乙腈和甲醇等有機溶劑為樣本前處理常用的試劑，因此常常需要在提取后，經(jīng)過氮吹、復(fù)溶、稀釋等步驟來減弱有機溶劑對免疫分析的影響。通過基因重組來制備重組抗體(hAb)，以提升其對有機溶劑的耐受性能和熱穩(wěn)定性，則可減化樣本的前處理流程，從而縮短檢測時間，提高檢測效率。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種具有高穩(wěn)定性、且其識別磺胺類藥物的性能并未改變的磺胺類藥物抗體hAb 4D11及其應(yīng)用。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明首先提供了一種高穩(wěn)定性的磺胺類藥物抗體hAb4D11，包括重鏈及輕鏈，

所述重鏈是基于SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，將包括第1、5–6、9–10、12–13、16、23、38、40、43、67–68、71、74、76–77、83–84、87–88、91和114位在內(nèi)的一個或多個氨基酸殘基置換為其他氨基酸所得到的；所述重鏈的氨基酸序列與SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列有至少94％的一致性；

所述輕鏈是基于SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，將包括第3、9、12–13、15、17、19、22、46、62、64、72–73、78、80–85、87、104和108位在內(nèi)的一個或多個氨基酸殘基置換為其他氨基酸所得到的；所述輕鏈的氨基酸序列與SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列有至少89％的一致性。

作為優(yōu)選，所述重鏈在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列中，至少進行了下列一個位點的置換：

第1位的谷氨酰胺置換為谷氨酸(Q1E)；

第5位的谷氨酰胺置換為纈氨酸(Q5V)；

第6位的谷氨酰胺置換為谷氨酸(Q6E)；

第9位的丙氨酸置換為甘氨酸(A9G)；

第10位的谷氨酸置換為甘氨酸(E10G)；