[發明專利]大腸桿菌噬菌體vB_EcoM_swi3及其應用

在審

• 申請號: 201911012910.0
• 申請日: 2019-10-23
• 公開（公告）號: CN110607284A
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發明（設計）人: 張燦;韓麗麗;任慧英;劉文華
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A23K10/18;A61K35/76;A61P31/04
• 代理公司: 37256 青島清泰聯信知識產權代理有限公司
• 代理人: 張潔

本發明公開一株保藏編號為CCTCC M 2019467的大腸桿菌噬菌體vB_EcoM_swi3，該噬菌體屬于肌尾噬菌體科，具有呈多面體的頭部和可伸縮的尾部結構，頭部直徑約80nm，尾部長約120nm；在固體培養基上可形成透亮的空斑，周圍無暈環，邊緣清晰規則，直徑約1～1.5mm；該噬菌體對養殖環境中的豬源和雞源的大腸桿菌，特別是豬源和雞源的致病性大腸桿菌具有良好的裂解效果，在防治豬大腸桿菌病和雞大腸桿菌病的藥物制劑、飼料添加劑等多個方面具有十分廣闊的的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，尤其涉及一株大腸桿菌噬菌體vB_EcoM_swi3及其應用。

背景技術

大腸桿菌屬于條件致病菌，致病力的強弱與大腸桿菌的血清型有關，不同動物之間也存在差異性。其中，豬大腸桿菌病和雞大腸桿菌病是在養殖環境中廣泛存在的，一旦染病會引起腹瀉、明顯影響動物機體的增重，使動物群體的死亡率急劇上升，發病動物還可以通過糞便等途徑傳染給其它健康的養殖動物造成大面積感染，而且養殖環境中的豬源和雞源大腸桿菌會造成動物群體的持續感染，給養殖戶造成很大的經濟損失。

目前，使用抗生素是養殖場防治大腸桿菌病的主要手段，但是由于抗生素的大量濫用，導致其存在破壞動物腸道微生物菌群結構、抗生素殘留、大腸桿菌嚴重耐藥及多重耐藥等缺陷，加大了疾病防控的難度，使得養殖成本不斷增加，給養殖業的發展造成巨大的阻力。

噬菌體是一種細菌依賴性病毒，能夠特異性的裂解宿主細菌，且與抗生素殺菌的作用機制不同，噬菌體裂解細菌不受細菌耐藥性的影響，且無殘留，具有研發時間短、成本低、特異性強、給藥量少、不破壞正常菌群構成等優點，在耐藥菌的防治工作中已取得一系列可喜成果。理論上，任何致病菌都有其對應的噬菌體，但目前我們找到的噬菌體種類和數量只是冰山一角，還有大量的噬菌體資源尚未開發。發掘能同時裂解多種不同動物來源細菌的噬菌體在臨床上具有更廣闊的應用前景，因此開發具有上述特征的噬菌體制劑對于養殖業的健康快速發展而言意義重大。

發明內容

本發明針對上述問題，提出一種能夠同時且高效殺滅養殖環境中豬源和雞源致病性大腸桿菌的噬菌體。

為了達到上述目的，本發明采用的技術方案為：

本發明提供了一種大腸桿菌噬菌體vB_EcoM_swi3，噬菌體保藏號為CCTCC M2019467，于2019年6月19日保藏于中國典型培養物保藏中心，分類命名為豬大腸桿菌噬菌體vB_EcoM_swi3。

上述大腸桿菌噬菌體在固體培養基上可以形成透亮的空斑，周圍無暈環，邊緣清晰規則，直徑為1～1.5mm；經透射電子顯微鏡觀察發現，該大腸桿菌噬菌體具有明顯的正多面體頭部結構和可伸縮的尾部結構，頭部直徑約80nm，尾部長約120nm，經鑒定該大腸桿菌噬菌體屬于肌尾噬菌體科。

對上述大腸桿菌噬菌體進行了一系列的性能測定，結果如下：

a.通過效價測定和最佳感染復數測定實驗得出，該大腸桿菌噬菌體的效價為6.4×10⁸pfu/mL，最佳感染復數為1；

b.通過pH、熱及紫外線穩定性實驗得出，該大腸桿菌噬菌體在pH6-8的中性條件下性能較為穩定、對紫外線較為敏感、當溫度在60℃以下時，活性較為穩定；

c.通過一步生長曲線測定得出，該大腸桿菌噬菌體的潛伏期約為25min，爆發期約為75min，爆發量約為25；

d.通過小鼠安全性實驗得出，該大腸桿菌噬菌體對小鼠正常生長不產生負面影響，且解剖檢查未見異常情況，說明該大腸桿菌噬菌體表現出較高的安全性；