[發(fā)明專利]NK細(xì)胞外泌體hsa-miR-9502在抗菌中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911000506.1
• 申請日: 2017-12-11
• 公開（公告）號: CN110613727B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐以兵;胡薇蕾;壽鑫;王國勝;陳海瓊
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué);上海博慷生物科技有限公司
• 主分類號: A61K31/7105
• 分類號: A61K31/7105;A61K35/17;A61P31/04
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 邱啟旺

本發(fā)明公開了經(jīng)跨膜IL?21激活的NK細(xì)胞(aNK)分泌的外泌體，及其包含的多種miRNA在抗菌中和抗腫瘤的應(yīng)用，為治療細(xì)菌感染和抗腫瘤提供了新的思路。此方法：(1)不同于抗生素治療，外泌體抗菌具有較低的副作用；(2)可通過聯(lián)合使用增強(qiáng)抗菌治療效果；(3)外泌體可低溫儲(chǔ)存,miRNA可以人工合成，成本低，可以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的生產(chǎn)；(4)外泌體和多種miRNA對多種細(xì)菌均有抑制效果，具有寬泛的抗菌譜；(5)miRNA作用于多種腫瘤細(xì)胞共有的信號通路，能抑制多種腫瘤，具有寬泛的抗腫瘤應(yīng)用。

本申請為申請?zhí)枮?017113093652、申請日為2017年12月11日、發(fā)明名稱“NK細(xì)胞外泌體及相關(guān)miRNA在抗菌和抗腫瘤中的應(yīng)用”的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及通過經(jīng)跨膜IL-21激活的NK細(xì)胞(aNK)分泌的外泌體(exosome)，以及相關(guān)的miRNA在抗菌中和抗腫瘤的應(yīng)用。

背景技術(shù)

外泌體是一類由細(xì)胞分泌的攜帶胞質(zhì)組分的納米級別的膜性小泡，由機(jī)體的多種細(xì)胞分泌，廣泛分布于唾液、血漿、乳汁等體液中。外泌體中含有蛋白質(zhì)、mRNA和miRNA等多種生物活性物質(zhì)。外泌體以膜融合的方式將miRNA和蛋白質(zhì)傳遞給其他細(xì)胞，作為細(xì)胞之間相互交流的橋梁。

NK細(xì)胞是固有免疫系統(tǒng)中主要的效應(yīng)細(xì)胞，已應(yīng)用于腫瘤的治療，其通過釋放穿孔素和顆粒酶殺傷被感染或發(fā)生癌變的細(xì)胞。NK細(xì)胞分泌的外泌體含有部分NK細(xì)胞的活性物質(zhì)，也具有抗腫瘤的能力。

NK細(xì)胞外泌體應(yīng)用于臨床治療最大的瓶頸在于因?yàn)镹K細(xì)胞在體外無法很好的擴(kuò)增，從而無法獲取足夠數(shù)量的外泌體。為了解決這一問題，我們采用人工抗原呈遞細(xì)胞(genetically-engineered artificial antigen-presenting cells,aAPCs)表達(dá)的跨膜IL-21來刺激NK細(xì)胞的增殖，aNK細(xì)胞的擴(kuò)增數(shù)量足以滿足臨床治療的需求。經(jīng)過14-18天的激活和擴(kuò)增，大量的外泌體由aNK細(xì)胞釋放進(jìn)入培養(yǎng)液中，這部分aNK細(xì)胞外泌體擁有典型的NK細(xì)胞特征蛋白，并對多種腫瘤細(xì)胞均具有殺傷能力。

在過去數(shù)十年中，抗生素的廣泛使用使得微生物耐藥頻率和其與相關(guān)的嚴(yán)重感染性疾病的以令人擔(dān)憂的速度增加。在革蘭氏陽性菌中，最重要的耐藥性病原體是耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌、耐β-內(nèi)酰胺的肺炎球菌和多藥耐藥性肺炎球菌，以及耐萬古霉素的腸球菌。肺炎克雷伯氏菌、大腸桿菌和奇異變形桿菌等革蘭氏陰性菌中的β-內(nèi)酰胺酶耐藥性是造成革蘭氏陰性菌耐藥性的重要原因。因此臨床治療迫切需要新穎的抗菌劑，尤其具有新穎作用機(jī)制的抗菌劑。

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)激活后的aNK細(xì)胞，其外泌體不僅富含NK細(xì)胞的胞漿成分，還富含大量的miRNA。這些miRNA在實(shí)驗(yàn)中可以顯著的抑制細(xì)菌的生長，具有出色的抗菌功能，同時(shí)發(fā)現(xiàn)這些miRNA在實(shí)驗(yàn)中可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長，具有抗腫瘤的功能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供aNK細(xì)胞分泌的外泌體，及其包含的miRNA在抗菌和抗腫瘤中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種經(jīng)跨膜IL-21激活的NK細(xì)胞分泌的外泌體在抗菌中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，所述外泌體包含一條或一條以上選自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2144所示序列的miRNA。

進(jìn)一步地，將所述外泌體單獨(dú)用于抗菌，或?qū)⑺鐾饷隗w與aNK細(xì)胞共同用于抗菌。

SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.1411所示的任一條miRNA。

SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2144所示的任一條miRNA在抗菌中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，用于制備抗菌制劑。