[發(fā)明專利]hsa-miR-378i作為標(biāo)志分子在制備診斷結(jié)核病試劑盒中的用途及其檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911000427.0
• 申請(qǐng)日: 2019-10-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110699443A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹斌;張敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 無(wú)錫市第二人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883
• 代理公司: 32200 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 曹毅;尹紅紅

本發(fā)明公開(kāi)了一種hsa?miR?378i作為標(biāo)志分子在制備診斷結(jié)核病試劑盒中的用途及其用于診斷結(jié)核病的檢測(cè)試劑盒，所述hsa?miR?378i來(lái)源于血漿外泌體，所述hsa?miR?378i的堿基序列如SEQ ID NO：1所示。所述檢測(cè)試劑盒中包含特異性檢測(cè)標(biāo)志分子的檢測(cè)試劑。同時(shí)還公開(kāi)了hsa?miR?378i聯(lián)合hsa?miR?148a?3p、hsa?miR?150?5p中任意一種或者兩種作為標(biāo)志分子在制備結(jié)核病診斷試劑盒中的用途。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，hsa?miR?378i對(duì)結(jié)核病的診斷具有更高的特異性、靈敏度以及診斷效能。因此，本申請(qǐng)?jiān)诮Y(jié)核病的診斷領(lǐng)域具有極大的應(yīng)用前景和市場(chǎng)前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及hsa-miR-378i作為標(biāo)志分子在制備診斷結(jié)核病試劑盒中的用途及其檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

目前，結(jié)核病（TB）已成為全球死亡的重要原因，這在很大程度上歸因于結(jié)核病患者的診斷和治療困難。早期發(fā)現(xiàn)和早期診斷是減少傳播機(jī)會(huì)、控制結(jié)核病疫情的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此，確定新的生物標(biāo)志物對(duì)結(jié)核病及時(shí)、準(zhǔn)確的診斷，在控制結(jié)核病上起著決定性的作用。近年來(lái)研究表明，外泌體與結(jié)核分枝桿菌感染關(guān)系密切，外泌體是由多種活細(xì)胞分泌的胞外囊泡小體，大小約為30-100nm，含有多種生物活性成分，參與細(xì)胞間的通訊和免疫調(diào)節(jié)，并參與了炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、免疫應(yīng)答等多種病理生理過(guò)程。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一類高度保守的非編碼RNA（non-coding RNA），通過(guò)與信使RNA中特異的互補(bǔ)序列相結(jié)合，誘導(dǎo)信使RNA降解或抑制蛋白質(zhì)翻譯，調(diào)節(jié)特定靶蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。在進(jìn)行細(xì)胞間信息交流時(shí)，細(xì)胞將miRNA濃集在一起，包裝進(jìn)外泌體，由外泌體被釋放到細(xì)胞間隙。外泌體作為miRNA載體，其運(yùn)載機(jī)制復(fù)雜，外泌體橫向轉(zhuǎn)運(yùn)細(xì)胞成分的能力，賦予它們以抑制或激活靶細(xì)胞活動(dòng)的能力，被認(rèn)為是細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的重要工具。

外泌體內(nèi)包裹的miRNA與相關(guān)蛋白復(fù)合物一起到達(dá)臨近或者遠(yuǎn)端細(xì)胞內(nèi)，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞間的信息交流。結(jié)核分枝桿菌感染的巨噬細(xì)胞所分泌的外泌體含有可溶性分枝桿菌蛋白，這些病原體抗原成分可以誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答。結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后分泌的外泌體可促進(jìn)巨噬細(xì)胞腫瘤壞死因子-α、干擾素-γ的分泌從而增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。結(jié)核分枝桿菌感染的小鼠巨噬細(xì)胞所釋放的外泌體與未感染的小鼠巨噬細(xì)胞的外泌體相比，其miRNA含量存在不同，外來(lái)的miRNA可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞的活化，刺激炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，誘導(dǎo)受體細(xì)胞的凋亡。攜帶RNA的外泌體，特別是miRNA，在疾病中的診斷中突顯潛力。

現(xiàn)有的輔助診斷結(jié)核病的miRNA是大多來(lái)源于血清，但由于血清成分復(fù)雜，可能導(dǎo)致miRNA來(lái)源不明，從而對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。然而，外泌體miRNA因受其表面膜的保護(hù)而具有較好的穩(wěn)定性。與血漿或血清miRNA相比，因其成分沒(méi)有血清復(fù)雜，使得外泌體富集的miRNA作為生物標(biāo)志物具有靈敏性高、特異性好等優(yōu)點(diǎn)。且樣本可通過(guò)無(wú)創(chuàng)方式獲得，使得血漿外泌體miRNA具備了成為無(wú)創(chuàng)、可靠、穩(wěn)定的生物標(biāo)志物的優(yōu)勢(shì)。現(xiàn)有技術(shù)公開(kāi)了通過(guò)血漿外泌體的miRNA作為標(biāo)志分子用于診斷結(jié)核病的技術(shù)方案，然而其檢測(cè)靈敏度低，不能實(shí)現(xiàn)高靈敏度、高特異性的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決以上現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供hsa-miR-378i作為標(biāo)志分子在制備診斷結(jié)核病試劑盒中的用途及其檢測(cè)試劑盒，標(biāo)志分子來(lái)源于血漿外泌體，其作為生物標(biāo)志物具有樣本要求低、穩(wěn)定性好、親和性好、靈敏性高、特異性好等優(yōu)點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

hsa-miR-378i作為標(biāo)志分子在制備診斷結(jié)核病試劑盒中的用途，所述的hsa-miR-378i來(lái)源于血漿外泌體，所述的hsa-miR-378i的堿基序列如 SEQ ID NO:1 所示。