[發(fā)明專利]一種基于DNA分子標(biāo)記的蝦夷扇貝活體性別鑒定方法

有效

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• 申請日: 2019-10-16
• 公開（公告）號: CN110607376B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張玲玲;郭振義;李亞娟;劉亮潔;王師;陸維;包振民
• 申請（專利權(quán)）人: 中國海洋大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12N15/11
• 代理公司: 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

本發(fā)明提供了一種基于DNA分子標(biāo)記的蝦夷扇貝活體性別鑒定方法。其是通過活體獲取蝦夷扇貝少量鰓絲，提取DNA，PCR擴增性別特異性DNA分子標(biāo)記，電泳檢測PCR產(chǎn)物中是否存在目的條帶，從而實現(xiàn)扇貝活體性別鑒定。本發(fā)明提供的性別特異性DNA分子標(biāo)記為雌性所特有，其核苷酸片段序列為SEQ ID NO:1。采用PCR引物擴增此分子標(biāo)記，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定蝦夷扇貝的性別，擴增出1859bp特異性條帶的樣品為雌性，沒有該條帶的為雄性。該方法可以實現(xiàn)蝦夷扇貝活體性別鑒定，方法簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，有助于加快蝦夷扇貝良種培育進程。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖性別鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于DNA分子標(biāo)記的蝦夷扇貝活體性別鑒定方法。

背景技術(shù)

蝦夷扇貝是我國北方最重要的海水養(yǎng)殖貝類之一，目前已在渤海及黃海北部形成規(guī)模化養(yǎng)殖，近10年來創(chuàng)造了數(shù)十億元的產(chǎn)值。蝦夷扇貝為雌雄異體，一般1-2年性成熟，在性腺進入生長期和成熟期時，扇貝性別通過肉眼即可辨認(rèn)。但當(dāng)性腺處于未分化期、休止期或增殖期時，性別難以通過肉眼辨認(rèn)，需要解剖獲得性腺，通過組織學(xué)切片或基因表達定量分析，實現(xiàn)性別鑒定。然而，在育種過程中，通常需要在保證活體的情況下檢測性別。

迄今為止，蝦夷扇貝活體性別鑒定方法尚未建立。DNA分子標(biāo)記是活體性別鑒定的重要工具，在很多水生生物中廣泛應(yīng)用。開發(fā)蝦夷扇貝性別特異分子標(biāo)記，發(fā)展簡單有效且成本低廉的活體性別鑒定方法，不僅有助于加快蝦夷扇貝良種培育進程，對貝類性別決定機制的研究也具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種基于DNA分子標(biāo)記的蝦夷扇貝活體性別鑒定方法，即一種基于DNA分子標(biāo)記對蝦夷扇貝進行活體性別鑒定的方法，從而彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明首先提供一種用于蝦夷扇貝性別鑒定的雌性特異性DNA分子標(biāo)記，所述的DNA分子標(biāo)記，其核苷酸片段序列為SEQ ID NO:1或其互補序列。

針對SEQ ID NO:1所示序列設(shè)計的引物，所述的引物，其上游引物的序列為SEQ IDNO:2,下游引物的序列為SEQ ID NO:3；

本發(fā)明還提供一種蝦夷扇貝活體性別鑒定方法，包括如下的步驟：

蝦夷扇貝活體性別鑒定方法，它包括以下步驟：

1)從蝦夷扇貝的鰓絲組織抽取基因組DNA，

2)檢測所提取的基因組DNA是否含有SEQ ID NO:1所示序列或互補序列的條帶。

本發(fā)明提供的蝦夷扇貝活體性別鑒定方法，只需蝦夷扇貝的少量鰓絲，即可實現(xiàn)性別鑒定，經(jīng)驗證準(zhǔn)確率達100％，存活率與對照組相比無明顯差異。與之前基因表達和形態(tài)學(xué)方法相比，該性別鑒定方法具有活體檢測、不依賴于性腺發(fā)育程度、簡單快速、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點，對于蝦夷扇貝性控育種和養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有重要意義。

附圖說明

圖1為利用活體獲取的鰓絲提取的DNA電泳結(jié)果示意圖，圖中編號1-16為提取的DNA樣品，M表示1kb DNA ladder。

圖2為利用活體獲取的鰓絲進行性別鑒定的結(jié)果示意圖，圖中雌性個體都能擴增出1859bp特異條帶，雄性個體均無法擴增出條帶，M表示2kb DNA ladder。

具體實施方式

本發(fā)明的基于DNA分子標(biāo)記的蝦夷扇貝活體性別鑒定方法主要包括四個步驟：1.剪取蝦夷扇貝的少量鰓絲；2.采用酚氯仿抽提法提取鰓絲基因組DNA，通過瓊脂糖凝膠電泳和核酸定量儀對DNA進行質(zhì)量檢測；3.采用本發(fā)明提供的雌性特異性引物進行PCR擴增；4.電泳檢測PCR產(chǎn)物是否含有SEQ ID NO:1所示序列的條帶(1859bp)。

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步說明。

實施例1：蝦夷扇貝性別特異分子標(biāo)記的獲得