[發明專利]一種硒香菇多糖的提取分離純化方法

無效

• 申請號: 201910973929.5
• 申請日: 2019-10-14
• 公開（公告）號: CN110511297A
• 公開（公告）日: 2019-11-29
• 發明（設計）人: 趙成誠;黃祥宏;李娜
• 申請（專利權）人: 武漢華聯科生物技術有限公司
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02
• 代理公司: 11427 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 宮建華<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.一種硒香菇多糖的提取分離純化方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1、香菇預處理

將香菇塊烘干，粉碎機粉碎過40目篩，得香菇粉末。向香菇粉末中加入石油醚于60℃水浴中加熱回流脫脂1h，離心收集殘渣，重復脫脂三次，溶劑揮干后，加入80％乙醇磁力攪拌，以除去小分子醇溶物，離心收集殘渣，依此過程重復三次，50℃干燥，得脫脂香菇粉末；

S2、堿溶性香菇多糖提取

取脫脂香菇粉末10g置于燒杯中，加入蒸餾水1000rpm磁力攪拌5min使其充分混勻，以1：50固液比例于80℃水浴中熱水浸提25min，離心分離上清液，去除水溶性物質，收集殘渣，以1：100固液比例加入0.5M氫氧化鈉溶液，4℃冰浴中超聲提取40min，離心得上清液Ⅰ；所得殘渣依照上述方法重復提取一次得上清液Ⅱ，合并兩次上清液，并用10％的醋酸溶液中和至pH＝6，用蒸餾水洗滌膠狀沉淀反復脫鹽后冷凍干燥得堿溶性香菇多糖粗品；

S3、香菇多糖的制備

稱取3.00g堿溶性香菇多糖粗品置三口燒瓶中，加入50mL異丙醇和20mL20％NaOH的混合溶液，冰浴攪拌3h使其分散均勻；

室溫下，取12g一氯乙酸溶于50mL異丙醇中，再與20mL20％NaOH溶液相混合；通過常壓滴液漏斗將混合液緩慢滴加入反應體系中，攪拌反應3h，將反應液升溫至60℃繼續攪拌30min；

另取12g一氯乙酸，20mL20％NaOH溶液和50mL異丙醇相混合，加入60℃反應體系中繼續反應1h，終止反應，冷卻至室溫，以1.0mol/L HCl溶液調節pH至7.0，旋蒸回收異丙醇，剩余反應液用再生纖維素透析袋流水透析3天，蒸餾水透析3天，旋轉蒸發濃縮透析液，脫蛋白，4倍體積無水乙醇沉淀過夜，離心收集沉淀，經冷凍干燥得白色粉末狀香菇多糖；

S4、采用乙醇沉淀法、Sevag法、鹽酸法、三氯乙酸法將香菇多糖的分離純化；

S5、利用亞硒酸鈉和香菇多糖在反應液中反應獲得硒香菇多糖。

2.如權利要求1所述的硒香菇多糖的提取分離純化方法，其特征在于：在步驟S1中，所述烘干溫度為50℃；香菇粉末與石油醚質量比為1：5；香菇粉末與80％乙醇的質量比為1：5；磁力攪拌的速度為1000rpm，時間為30min；離心的速度為4000rpm，時間為10min。

3.如權利要求1所述的硒香菇多糖的提取分離純化方法，其特征在于：在步驟S2中，超聲提取時的超聲功率為80w；頻率為40kHz；離心的速度4000rpm，時間為120min。