[發(fā)明專利]一種根瘤促生菌微桿菌屬X-18及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910938194.2
• 申請(qǐng)日: 2019-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN110551664B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 莊家堯;劉超;王陽陽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A01N63/20;A01P21/00;C12R1/01
• 代理公司: 南京申云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

本發(fā)明公開了一種根瘤促生菌微桿菌屬X?18及其應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。所述根瘤促生菌的分類命名為微桿菌屬(Microbacterium sp.)X?18，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期：2019年4月8日，保藏編號(hào)CCTCC No：M2019236，保藏地址：中國武漢武漢大學(xué)。本發(fā)明的微桿菌屬X?18應(yīng)用于豆科植物刺槐中，能夠促進(jìn)刺槐有效固氮，提供刺槐生長所需的氮素，使根瘤促生菌與植物共生固氮能力得到明顯發(fā)揮，從而促進(jìn)刺槐植株的生長發(fā)育，發(fā)展前景可期。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種根瘤促生菌微桿菌屬(Microbacterium sp.)X-18及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

客土噴播技術(shù)是將土壤生長基質(zhì)材料的混合物和植物種子均勻、高壓噴播在巖土坡面上的綠化技術(shù)。該技術(shù)的生長基質(zhì)材料混合物中配制有篩選好的土壤菌，主要是針對(duì)巖石等硬質(zhì)邊坡以及為植物能夠在硬質(zhì)邊坡營造適宜生長環(huán)境研發(fā)的一種綠化技術(shù)。所篩選的土壤菌作為該技術(shù)生長基質(zhì)材料的重要成分之一發(fā)揮著兩個(gè)作用：一是能對(duì)土壤生態(tài)機(jī)制變化和環(huán)境脅迫做出反應(yīng)，加速巖體的侵蝕，有效提高巖壁與噴播基質(zhì)界面融合性；二是促進(jìn)植物的生長發(fā)育，保證植物在脅迫環(huán)境中碳素、氮素等營養(yǎng)的供應(yīng)。然而在實(shí)際工程中，這一技術(shù)的利用受到很多的限制，一方面是噴播基質(zhì)難以長久在巖面維持，另一方面針對(duì)噴播樹種能夠起到促生作用的土壤微生物的發(fā)現(xiàn)很少。

土壤微生物在生命活動(dòng)中將空氣中的惰性氮素轉(zhuǎn)化為植物可直接吸收的離子態(tài)氮素，保證植物的氮素營養(yǎng)；同時(shí)，經(jīng)具有促生作用的微生物處理過的植物氣孔導(dǎo)度升高加快植物細(xì)胞的氣體交換，且胞間CO₂濃度增加，使光合作用所需的CO₂充備，進(jìn)而更提高了植物的光合速率，促進(jìn)植物光合作用；此外，微生物在其生命活動(dòng)過程中可分解土壤中難容的礦物降解無機(jī)和有機(jī)污染物。這些都保證了植物在微環(huán)境中所需各營養(yǎng)成分的供應(yīng)以及植物各生命活動(dòng)的正常進(jìn)行。明顯的，有針對(duì)性的篩選特定植物的促生菌是客土噴播綠化技術(shù)能夠廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵之一。目前，國內(nèi)針對(duì)不同植物，篩選適宜的根瘤促生菌株鮮有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種根瘤促生菌微桿菌屬X-18，為護(hù)坡植物促生菌菌庫的建立提供菌種支持。本發(fā)明的另一目的是提供上述微桿菌屬X-18在促進(jìn)刺槐結(jié)瘤固氮中的應(yīng)用。能夠提供高水平的氮素，促進(jìn)刺槐結(jié)瘤固氮。本發(fā)明的再一目的是提供上述微桿菌屬X-18在促進(jìn)刺槐生長中的應(yīng)用。能有效促進(jìn)地徑、苗高與葉面積的增長，長勢良好。

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種根瘤促生菌，其分類命名為微桿菌屬(Microbacterium sp.)X-18，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期：2019年4月8日，保藏編號(hào)CCTCC No：M2019236，保藏地址：中國武漢武漢大學(xué)。

微桿菌屬X-18在促進(jìn)刺槐結(jié)瘤固氮中的應(yīng)用。

所述的應(yīng)用，將微桿菌屬X-18的發(fā)酵菌液稀釋后直接在刺槐幼苗的根際土壤澆施。

所述的應(yīng)用，包括以下步驟：

1)從斜面上取微桿菌屬X-18，在營養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基上，35℃活化24h；

2)將活化后的菌株用接種環(huán)挑取一環(huán)菌泥加入到LB液體培養(yǎng)基中，35℃，200r/min恒溫震蕩24h制備種子液；

3)按3％的接種量取種子液接種于液體培養(yǎng)基，35℃，200r/min搖床振蕩培養(yǎng)36h，得到發(fā)酵菌液；

4)使用前，用無菌水將步驟3)得到的發(fā)酵菌液稀釋后，添加到栽植好的刺槐幼苗盆栽中，60mL/盆。

步驟3)中，液體培養(yǎng)基為蛋白胨10g；酵母粉3g；氯化鈉5g；無菌水1000mL；pH 5.6。