[發明專利]一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法

在審

• 申請號: 201910921374.X
• 申請日: 2019-09-26
• 公開（公告）號: CN110628618A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 劉波;王賢萌
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M1/00;C12N5/00;C08J7/12;C08L83/04
• 代理公司: 21200 大連理工大學專利中心
• 代理人: 梅洪玉;劉秋彤

1.一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法，其特征在于，具體過程為：

步驟一、設計細胞生長的微圖案陣列，通過干法刻蝕加工得到硅板(1-2)；

步驟二、將聚二甲基硅氧烷PDMS混合液(1-1)倒在硅板(1-2)上，對硅板(1-2)加熱后切割得到固體PDMS圖章(1-3)，對固體PDMS圖章(1-3)的微圖案表面進行硅烷化處理；

步驟三、將纖連蛋白溶液滴加到固體PDMS圖章(1-3)的微圖案表面并晾干；

步驟四、用泊洛沙姆溶液對玻璃基底(1-5)進行疏水化處理；

步驟五、然后將固體PDMS圖章(1-3)的微圖案表面貼于玻璃基底(1-5)表面，使纖連蛋白(1-4)轉移至玻璃基底(1-5)上；

步驟六、進行細胞種植，種植后的細胞只能在預設形狀的纖連蛋白(1-4)區域生長，從而精準控制細胞的生長邊界。

2.根據權利要求1所述的一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法，其特征在于，所述步驟一中，微圖案陣列中的微圖案的邊長不超過20μm，微圖案間距不低于100μm，干法刻蝕的深度為10μm。

3.根據權利要求1或2所述的一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法，其特征在于，所述步驟二中，聚二甲基硅氧烷PDMS混合液(1-1)是由聚二甲基硅氧烷PDMS的預聚體和固化劑按照10:1的質量比混合制得的；加熱溫度為70-80℃，加熱時間為60-90min。

4.根據權利要求1或2所述的一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法，其特征在于，所述步驟二中，硅烷化處理的過程具體為：將3-氨丙基三乙氧基硅烷與丙酮溶液按1:15-1:20的比例混合，配制硅烷化溶液；將硅烷化溶液滴于固體PDMS圖章(1-3)的微圖案陣列表面20-30min，依次用丙酮、無水乙醇、純水清洗，然后置于110-120℃下加熱60-90min。

5.根據權利要求3所述的一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法，其特征在于，所述步驟二中，硅烷化處理的過程具體為：將3-氨丙基三乙氧基硅烷與丙酮溶液按1:15-1:20的比例混合，配制硅烷化溶液；將硅烷化溶液滴于固體PDMS圖章(1-3)的微圖案陣列表面20-30min，依次用丙酮、無水乙醇、純水清洗，然后置于110-120℃下加熱60-90min。

6.根據權利要求1、2或5所述的一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法，其特征在于，所述步驟三中，纖連蛋白溶液是纖連蛋白按2％w/v的比例溶于磷酸緩沖鹽溶液中制得的。

7.根據權利要求3所述的一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法，其特征在于，所述步驟三中，纖連蛋白溶液是纖連蛋白按2％w/v的比例溶于磷酸緩沖鹽溶液中制得的。

8.根據權利要求4所述的一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法，其特征在于，所述步驟三中，纖連蛋白溶液是纖連蛋白按2％w/v的比例溶于磷酸緩沖鹽溶液中制得的。

9.根據權利要求1、2、5、7或8所述的一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法，其特征在于，所述步驟四中，泊洛沙姆溶液是由泊洛沙姆按0.5％w/v的比例溶于磷酸緩沖鹽溶液制得的。

10.根據權利要求6所述的一種利用PDMS圖章精準控制單個細胞形狀的方法，其特征在于，所述步驟四中，泊洛沙姆溶液是由泊洛沙姆按0.5％w/v的比例溶于磷酸緩沖鹽溶液制得的。