[發明專利]干擾長非編碼RNA的siRNA在制備治療乳腺癌藥物中的應用

有效

• 申請號: 201910918998.6
• 申請日: 2019-09-26
• 公開（公告）號: CN110577952B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發明（設計）人: 張智弘;狄世豪
• 申請（專利權）人: 江蘇省人民醫院（南京醫科大學第一附屬醫院）
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/6886;A61K45/00;A61P35/00;G01N33/574
• 代理公司: 南京源點知識產權代理有限公司 32545
• 代理人: 王佳妹

本發明屬于基因工程領域，特別涉及長非編碼RNA LCT?AS1在乳腺癌中作為發生和轉移的分子標記物且成為乳腺癌治療靶點的潛在作用。通過改變長非編碼RNA LCT?AS1的表達對乳腺癌細胞的增殖、轉移等產生影響，說明敲低長非編碼RNA LCT?AS1的表達能夠抑制乳腺癌細胞的增殖、轉移和細胞周期進展，促進凋亡。

技術領域

本發明屬于基因工程領域，特別涉及干擾長非編碼RNA的siRNA在制備治療乳腺癌藥物中的應用。

背景技術

乳腺癌（Breast Cancer, BC）是我國最常見的惡性腫瘤之一，也是全世界婦女癌癥死亡的首要原因，隨著手術、內分泌治療、化療和靶向治療等綜合性治療手段的發展，乳腺癌的死亡率呈下降趨勢，但仍是導致絕經后婦女癌癥相關死亡的主要原因之一，占所有癌癥死亡人數的23%。早期乳腺癌可通過治療獲得治愈效果，但由于女性對乳房的自我檢查和臨床檢查的疏忽，絕大多數乳腺癌患者在初診時已處于臨床中晚期，即使綜合運用以上治療手段，仍有較高的復發轉移風險，預后不容樂觀。

芯片技術和全轉錄組測序技術研究發現人類基因組中能編碼蛋白的RNA僅占 2%，其余的均為非編碼RNA (non-coding RNA， ncRNA)。長非編碼RNA（Long non-coding RNA,LncRNA）是一類長度超過200nt，無蛋白質編碼能力的RNA 分子，在轉錄、轉錄后以及表觀遺傳水平廣泛參與調控細胞的各種生命活動，其異常表達與惡性腫瘤的發生發展之間存在著密切聯系。大量研究表明，lncRNA在乳腺癌的發生發展過程中發揮著重要的作用。例如，LncRNA AFAP1-AS1、ARNLA、ZNF469、DANCR達水平的升高和LncRNA H19、LncRNA GASS表達水平的降低與TNBC的預后不良有關。又如，LncRNA MALAT1調節了三陰性乳腺癌（TripleNegative Breast Cancer, TNBC）發生和進展的關鍵途徑，高表達的MALAT1可以通過競爭性結合miR-34a/c-5p和miR-449a/b等靶向mRNAs來上調c-MET和SOX4的表達水平，進而促進了腫瘤細胞的增殖和轉移。

發明內容

本發明發現LncRNA LCT antisense RNA 1(LCT-AS1)在乳腺癌組織中與鄰近正常組織相比表達顯著上調。研究發現過表達LncRNA LCT-AS1會促進乳腺癌細胞的增殖與轉移，是乳腺癌的一個重要致癌因子，可作為乳腺癌發生和轉移的潛在分子標記物和乳腺癌治療的一個靶點，因此在預測和治療乳腺癌方面具有良好的應用前景。

LncRNA LCT-AS1是一條長度為1862bp的LncRNA，是由發明人提供正常乳腺組織和乳腺癌組織標本，通過TCGA數據庫分析和qPCR的檢測篩選出的在乳腺癌組織中顯著高表達的RNA。由本發明首次發現它在乳腺癌中的調控作用，具有新穎性。

本發明的目的是提供用于判斷乳腺癌預后情況或作為乳腺癌治療靶點的LncRNALCT-AS1，其核苷酸序列為SEQ ID NO:1，

本發明還涉及識別所述的長非編碼RNA的標記物在制備判斷乳腺癌治療預后情況的診斷產品中的應用，所述的標記物包括但不限于：

（1）結合所述長非編碼RNA的引物/引物組或熒光標記的結合所述長非編碼RNA的引物/引物組；

（2）結合所述長非編碼RNA的小分子化合物；

（3）結合所述長非編碼RNA的生物大分子，所述的生物大分子包括但不限于：抗體或抗體功能片段、熒光標記的抗體或抗體功能片段、RNA結合蛋白或其功能片段、熒光標記的RNA結合蛋白或其功能片段。

所述的引物組或熒光標記的引物組的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，

Primer F（SEQ ID NO：2）：

5’- CGGGAGGAAGATAAACGGGG-3’，