[發(fā)明專利]一種用于檢測瘦肉型肉鴨的復(fù)合分子標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910917714.1
• 申請日: 2019-09-26
• 公開（公告）號(hào): CN110628916B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 歐陽清淵;王郁石;王繼文
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11;C12N15/12
• 代理公司: 成都熠邦鼎立專利代理有限公司 51263
• 代理人: 湯楚瑩

本發(fā)明本發(fā)明屬于家禽基因功能技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于檢測瘦肉型肉鴨的復(fù)合分子標(biāo)記及其應(yīng)用。本發(fā)明以包含MEF2D基因的待測鴨全基因組DNA為模板，用引物對1和2為引物，PCR擴(kuò)增鴨MEF2D基因CAG重復(fù)區(qū)域后分別進(jìn)行正反向測序，用引物對3通過毛細(xì)管電泳鑒定CAG重復(fù)多態(tài)性。將正反向測序得到的CAG重復(fù)多態(tài)性與毛細(xì)管電泳得到的結(jié)果進(jìn)行校正后得到最終CAG重復(fù)基因型。同時(shí)，獲得CAG內(nèi)部SNP單倍型組合。最后CAG重復(fù)和內(nèi)部SNP單倍型組合形成的復(fù)合基因型與屠宰性狀關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)提高瘦肉率、胸肌率和腿肌率同時(shí)降低皮脂率和腹脂率的復(fù)合分子標(biāo)記。本發(fā)明在鴨身上首次利用微衛(wèi)星和單核苷酸突變兩種分子標(biāo)記形成復(fù)合標(biāo)記。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及家禽基因功能技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測瘦肉型肉鴨的復(fù)合分子標(biāo)記及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著消費(fèi)水平的不斷提高，市場對肉鴨的需求趨向多元化，但目前市場上的品種多存在脂肪率高、瘦肉率低的特點(diǎn)，鮮有低低脂多肉型品種的存在。同時(shí)，脂肪率高的鴨肉在存儲(chǔ)和運(yùn)輸過程中會(huì)更容易酸化腐敗，給深加工帶來一定的困難。因此，培育瘦肉型肉鴨是現(xiàn)代育種工作中亟待解決的問題。

在傳統(tǒng)育種中，脂肪率和瘦肉率無法通過活體直接測定，必須屠宰后進(jìn)行測定，造成了無法將優(yōu)良個(gè)體留作種用的問題。育種工作者也嘗試用改變飼料轉(zhuǎn)化率、雜交等方式來得到優(yōu)良的瘦肉型肉鴨，但因?yàn)橛N周期長等原因育種效果不明顯。目前，包括X射線攝影、核磁共振及超聲波在內(nèi)的成像技術(shù)也被應(yīng)用到檢測肉鴨的胸肌率和皮脂率中，但由于設(shè)備不便于攜帶、精確率不高等原因應(yīng)用還不太廣泛。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展，分子標(biāo)記輔助選擇越來越受到育種工作者的青睞，通過分子標(biāo)記輔助選擇可以有目的的進(jìn)行基因累加，把多種優(yōu)質(zhì)肉鴨的重要性狀結(jié)合起來，大大縮短鴨育種的年限。

盡管STR和SNP分子標(biāo)記在鴨生產(chǎn)性狀相關(guān)候選基因鑒定和應(yīng)用方面取得了一些進(jìn)展。但是STR存在的無效等位基因會(huì)使基因型判斷存在錯(cuò)誤，目前也有一些學(xué)者提出可以用毛細(xì)管電泳和sanger測序的結(jié)果互相校正以得到更加準(zhǔn)確基因型。同時(shí)，單個(gè)SNP的效應(yīng)也不強(qiáng)，也有學(xué)者通過多個(gè)SNP組成單倍型來獲得更高的效應(yīng)。更加準(zhǔn)確的STR分型和多個(gè)SNP位點(diǎn)組成的復(fù)合標(biāo)記在鴨的育種重還未見報(bào)道。

MEF2基因家族是調(diào)控骨骼肌發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子，而作為其家族成員的MEF2D基因?qū)∪獾陌l(fā)生、發(fā)育和再生具有重要作用。前人的研究發(fā)現(xiàn)，在鴨MEF2D基因外顯子中存在CAG重復(fù)的多態(tài)性，而其STR區(qū)域單核苷酸突變情況還有待探索。因此研究MEF2D基因CAG重復(fù)區(qū)域SNP情況，并開發(fā)能準(zhǔn)確選育瘦肉型肉鴨的復(fù)合分子標(biāo)記很有必要。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：

1)傳統(tǒng)的瘦肉型肉鴨選育主要是通過對同胞或后裔進(jìn)行屠宰測定胴體性狀,然后根據(jù)遺傳參數(shù)進(jìn)行推測從而達(dá)到選育的效果。但是，因屠宰需投人大量的資金和相對較長的時(shí)間,同時(shí)需要測量人員要有足夠的熟練度來保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

2)成像技術(shù)輔助選育也被應(yīng)用于瘦肉型肉鴨的選育工作中，根據(jù)核磁共振或超聲波技術(shù)檢測胸肌的厚度，再根據(jù)皮下脂肪和胸肌厚的轉(zhuǎn)換公式估計(jì)出皮下脂肪的含量。超聲波成像技術(shù)的準(zhǔn)確率在60％左右，核磁共振成像技術(shù)的準(zhǔn)確率在80％左右但由于其設(shè)備不便于攜帶在試劑運(yùn)用過程中并不廣泛。

3)STR分子標(biāo)記輔助越來越受到育種工作者的青睞，但是由于無效等位基因的存在使微衛(wèi)星分型工作存在一定的錯(cuò)誤。

4)單個(gè)SNP效應(yīng)不夠強(qiáng)等原因?qū)е履壳澳軌蛴糜趯?shí)踐的分子標(biāo)記還很有限。

基于上述情況，本發(fā)明提出了一種用于檢測瘦肉型肉鴨的復(fù)合分子標(biāo)記及其應(yīng)用，可有效解決以上問題。

發(fā)明內(nèi)容