[發(fā)明專利]流感病毒基質(zhì)蛋白M1的單克隆抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910912806.0
• 申請日: 2019-09-25
• 公開（公告）號: CN110627901B
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蒲娟;佟琪;宗亞楠;王明暘;曲潤康;劉金華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;C12N15/13;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/68;A61K39/395;A61P31/16
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及流感病毒基質(zhì)蛋白M1的單克隆抗體及其應(yīng)用。本發(fā)明提供流感病毒基質(zhì)蛋白M1的單克隆抗體，所述單克隆抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.1?3所示；所述輕鏈可變區(qū)的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.4?6所示。該單克隆抗體能夠特異識別并結(jié)合多種亞型的流感病毒基質(zhì)蛋白M1、在流感病毒亞型間具有廣譜適用性，同時具有較高的特異性和敏感性，可以很好地應(yīng)用于免疫印跡實驗、間接免疫熒光實驗以及免疫沉淀等技術(shù)，具有較高的應(yīng)用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及流感病毒基質(zhì)蛋白M1的單克隆抗體、分泌產(chǎn)生流感病毒基質(zhì)蛋白M1的單克隆抗體的雜交瘤細胞及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

抗體技術(shù)主要分為單克隆抗體技術(shù)和多克隆抗體技術(shù)。抗原由多個抗原決定簇決定，由一種抗原決定簇刺激機體，一個B淋巴細胞接受該抗原產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體。由多種抗原決定簇刺激機體，相應(yīng)地就產(chǎn)生多種多樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體。相比較于單克隆抗體，多克隆抗體可能存在多種亞型，導(dǎo)致特異性較差。在使用多克隆抗體進行免疫實驗時，會產(chǎn)生背景值，對實驗結(jié)果造成不同程度的影響。單克隆抗體所具備的特異性和敏感性高的特點使其廣泛應(yīng)用于分子實驗以及臨床診斷中。

流感病毒的M1蛋白是其病毒粒子中含量最為豐富的蛋白，M1蛋白能夠維持流感病毒粒子形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整，在病毒基因組的復(fù)制轉(zhuǎn)錄、病毒的組裝出芽中發(fā)揮著重要的作用。此外，M1蛋白在流感病毒各亞型之間高度保守。因此，開發(fā)能夠特異性識別多種亞型流感病毒M1蛋白的廣譜性單克隆抗體，將有利于流感的診斷以及分子機制的深入探究，具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種具有較高的敏感性和特異性的、能夠特異性結(jié)合多種亞型流感病毒基質(zhì)蛋白M1的廣譜型單克隆抗體以及產(chǎn)生該單克隆抗體的雜交瘤細胞。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

第一方面，本發(fā)明提供流感病毒基質(zhì)蛋白M1的單克隆抗體，所述單克隆抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，能夠特異性結(jié)合流感病毒基質(zhì)蛋白M1，所述重鏈可變區(qū)的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.1-3所示；所述輕鏈可變區(qū)的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.4-6所示。

優(yōu)選地，所述單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為如下任一種：

(1)如SEQ ID NO.7所示；

(2)如SEQ ID NO.7所示的序列經(jīng)一個或多個氨基酸的缺失、替換或插入得到的具有相同功能蛋白的氨基酸序列；

(3)與如SEQ ID NO.7所示的序列具有至少70％同源性且具有相同功能蛋白的氨基酸序列；所述同源性優(yōu)選為至少85％；更優(yōu)選為至少95％。

所述單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為如下任一種：

(1)如SEQ ID NO.8所示；

(2)如SEQ ID NO.8所示的序列經(jīng)一個或多個氨基酸的缺失、替換或插入得到的具有相同功能蛋白的氨基酸序列；

(3)與如SEQ ID NO.8所示的序列具有至少70％同源性且具有相同功能蛋白的氨基酸序列。所述同源性優(yōu)選為至少85％；更優(yōu)選為至少95％。

本發(fā)明所述的單克隆抗體能夠特異性結(jié)合多種亞型流感病毒基質(zhì)蛋白M1，其抗原識別區(qū)位于M1蛋白的169-252位氨基酸區(qū)域內(nèi)。

更優(yōu)選地，所述單克隆抗體的亞型為輕鏈為κ鏈的IgG1。

具體地，所述單克隆抗體的重鏈的氨基酸序列為如下任一種：