[發(fā)明專利]一種熒光定量RT-PCR試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910906383.1
• 申請日: 2019-09-24
• 公開（公告）號: CN110643704A
• 公開（公告）日: 2020-01-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 金潔;潘佳佳;王敬瀚;黃淑娟;黃建松;黃昕
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 33200 杭州求是專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 趙杭麗

1.一種熒光定量RT-PCR試劑盒，其特征在于，試劑盒包括對照品、分子標志物BCAT1反應(yīng)液、內(nèi)參基因甘油醛-3-磷酸脫氫酶反應(yīng)液、TBgreen qPCR mix試劑，其中分子標志物BCAT1反應(yīng)液由分子標志物BCAT1引物對和蒸餾水組成；內(nèi)參基因GAPDH反應(yīng)液由內(nèi)參基因GAPDH引物對和蒸餾水組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熒光定量RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述分子標志物BCAT1引物對的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熒光定量RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述的內(nèi)參基因GAPDH引物對的上游引物序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物序列如SEQ ID NO.4所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熒光定量RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述對照品是急性髓系白血病細胞系THP-1的cDNA。

5.利用權(quán)利要求1所述的試劑盒檢測急性髓系白血病患者BCAT1相對表達量的方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn)：

(1)取人體骨髓或外周血1.5-2ml，用EDTA抗凝，低溫冷藏備用；

(2)取血液標本在2h內(nèi)用Trizol法及經(jīng)典氯仿法抽屜單核細胞RNA，DEPC水溶解，-80℃保存；

(3)采用商用試劑盒對步驟2)獲得的樣本RNA進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，得到cDNA模板；

(4)將cDNA模板，BCAT1反應(yīng)液及TBgreen qPCR mix混合后，組成反應(yīng)體系，同時，cDNA模板、內(nèi)參基因GAPDH反應(yīng)液TBgreen qPCR mix混合后，組成該樣本的內(nèi)參反應(yīng)體系；采用熒光定量PCR法檢測樣本骨髓或外周血中分子標志物BCAT1的相對表達量。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，熒光定量PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性3min，94℃變性15s，60℃退火延伸1min，共45個循環(huán)。