[發明專利]一種鴨乙型肝炎病毒重組聚合酶等溫擴增檢測方法

在審

• 申請號: 201910894805.8
• 申請日: 2019-09-20
• 公開（公告）號: CN111593138A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 馬秀麗;朱蘊暖;劉娜;黃兵;劉存霞;胡峰;郭效珍;李玉峰;于可響;宋敏訓;艾武;亓麗紅
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院家禽研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

1.一種檢測鴨乙型肝炎病毒的RPA引物對，包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

上游引物F：5’-GCCTTAGCCAATGTGTATGA-3’；

下游引物R：5’-GGTGGAACAGGAGTAGTAGT-3’。

2.權利要求1所述的RPA引物對在制備檢測鴨乙型肝炎病毒的試劑盒中的應用。

3.遺傳標記物在制備檢測鴨乙型肝炎病毒的試劑盒中的應用，所述遺傳標記物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.一種檢測鴨乙型肝炎病毒的試劑盒，包括權利要求1所述的RPA引物對，以及檢測所必須的試劑。

5.根據權利要求4所述的檢測鴨乙型肝炎病毒的試劑盒，其特征在于：所述檢測所必須的試劑包括：Rehydration Buffer、模板、ddH₂O和MgAc。

6.權利要求5所述的試劑盒在檢測鴨乙型肝炎病毒中的應用。

7.一種鴨乙型肝炎病毒重組聚合酶等溫擴增檢測方法，包括以下步驟：

(1)提取待測物的基因組DNA，利用RPA引物對進行重組聚合酶等溫擴增，所述RPA引物對包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列如如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

(2)將上述擴增產物進行電泳，觀察是否出現239bp條帶；若出現239bp條帶，則判斷為鴨乙型肝炎病毒陽性，若未出現239bp條帶，則判斷為鴨乙型肝炎病毒陰性。

8.根據權利要求7所述的鴨乙型肝炎病毒重組聚合酶等溫擴增檢測方法，其特征在于：所述步驟(1)中，重組聚合酶等溫擴增的反應體系包括：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的RPA引物各1.2μL，Rehydration Buffer 29.5μL，模板3μL，ddH₂O 12.6μL，MgAc 2.5μL。

9.根據權利要求7所述的鴨乙型肝炎病毒重組聚合酶等溫擴增檢測方法，其特征在于：所述步驟(1)中，重組聚合酶等溫擴增的條件為：40℃反應25min。

10.根據權利要求7所述的鴨乙型肝炎病毒重組聚合酶等溫擴增檢測方法，其特征在于：所述步驟(2)中，進行電泳的具體方式為：取5μL重組聚合酶等溫擴增的產物，加入2％瓊脂糖凝膠中進行電泳。