[發(fā)明專利]TCRγδ為靶點(diǎn)的嵌合抗原受體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910875313.4
• 申請日: 2019-09-17
• 公開（公告）號: CN110615847B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張同存;祝海川;張子健
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢波睿達(dá)生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/66;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 武漢科皓知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 艾小倩

本發(fā)明公開了一種TCRγδ為靶點(diǎn)的嵌合抗原受體及其應(yīng)用，從N端到C端順次拼接信號肽、單鏈抗體ScFv、Strep tagⅡ、CD8 hinge、CD28跨膜區(qū)、CD28胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域、4?1BB和CD3ζ鏈，所述單鏈抗體ScFv能夠識別腫瘤細(xì)胞表面的TCRγδ。該TCRγδ為靶點(diǎn)的嵌合抗原受體用于修飾免疫細(xì)胞，修飾后的免疫細(xì)胞能有效地殺傷任何表面表達(dá)TCRγδ的腫瘤細(xì)胞。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物領(lǐng)域，具體是指一種以TCRγδ為靶點(diǎn)治療γδT細(xì)胞淋巴瘤/白血病的嵌合抗原受體(CAR)及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

CAR-T細(xì)胞療法成為近年來最為火熱和有效的腫瘤治療手段之一，CAR-T細(xì)胞全稱為嵌合抗原受體T細(xì)胞(Chimeric Antigen Receptor T-Cell),原理為通過基因工程的方法，將能識別某種腫瘤抗原的抗體單鏈可變區(qū)(Scfv)與CD3ζ鏈的胞內(nèi)區(qū)在體外偶聯(lián)為一個(gè)嵌合蛋白，通過基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的患者T細(xì)胞，使其表達(dá)嵌合抗體受體(CAR)。患者的T細(xì)胞被“重編程”后，生成大量具有殺傷性的CAR-T細(xì)胞，能夠特異性的靶向腫瘤細(xì)胞。CAR-T與傳統(tǒng)的免疫療法相比，具有治療更精確、靶向更精準(zhǔn)、殺瘤更廣泛、效果更持久等顯著優(yōu)勢。

T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤/白血病(T-LBL/ALL)是高度惡性且復(fù)發(fā)率侵襲性淋巴瘤，主要高發(fā)于男性群體，在小兒和成人非霍奇金淋巴瘤中分別占30％和2％左右。依據(jù)T細(xì)胞抗原受體(TCR)類型差異，通常將成熟的T細(xì)胞分為γδT細(xì)胞亞型和αβT細(xì)胞亞型。在T細(xì)胞淋巴瘤/白血病中，一些特定的腫瘤細(xì)胞起源于γδT細(xì)胞，因此腫瘤細(xì)胞表面均會強(qiáng)表達(dá)TCRγδ，例如皮膚γδT細(xì)胞淋巴瘤，肝脾T淋巴細(xì)胞瘤及一部分外周T細(xì)胞淋巴瘤，親上皮性腸道T淋巴細(xì)胞瘤等淋巴瘤疾病。γδT細(xì)胞淋巴瘤在臨床上面臨著沒有特定藥物靶點(diǎn)從而導(dǎo)致治療效果差，復(fù)發(fā)率高和死亡率高等現(xiàn)象。然而，并未見以TCRγδ為靶點(diǎn)有效治療腫瘤方法。

因此，尋找合適的γδT細(xì)胞淋巴瘤特異性靶點(diǎn)有助于臨床上改善該類腫瘤的治療。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種以TCRγδ為靶點(diǎn)治療γδT細(xì)胞淋巴瘤/白血病的嵌合抗原受體(CAR)，攜帶廣譜性識別各亞型TCRγδ的ScFv序列的CAR-T細(xì)胞可以有效的殺傷任何表面表達(dá)TCRγδ的腫瘤細(xì)胞。

本發(fā)明提供一種嵌合型抗原受體，從N端到C端順次拼接信號肽、單鏈抗體ScFv、Strep tag Ⅱ、CD8 hinge、CD28跨膜區(qū)、胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括胞內(nèi)信號刺激域，所述單鏈抗體ScFv識別并結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的TCRγδ。

進(jìn)一步地，嵌合型抗原受體的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域還包括共刺激結(jié)構(gòu)域，共刺激結(jié)構(gòu)域選自CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CD83中的一種或多種，優(yōu)選為CD28和4-1BB；所述胞內(nèi)信號刺激域選自CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD8、FcγRI-γ、FcγRIII-γ、FcεRIβ、FcεRIγ、DAP10、DAP12、CD32、CD79a，優(yōu)選為CD3ζ。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，嵌合型抗原受體的單鏈抗體ScFv由重鏈可變區(qū)V_H、連接多肽Linker、輕鏈可變區(qū)V_L組成；優(yōu)選地，所述重鏈可變區(qū)V_H的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述輕鏈可變區(qū)V_L的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，優(yōu)選地，所述重鏈可變區(qū)V_H的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述輕鏈可變區(qū)V_L的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。