[發明專利]NKA-9型大孔樹脂純化甘草總黃酮工藝研究及其對亞硝酸鹽清除作用

在審

• 申請號: 201910870342.1
• 申請日: 2019-09-16
• 公開（公告）號: CN110681183A
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發明（設計）人: 宋吉明;朱澤華;董莊莊;方晶
• 申請（專利權）人: 安徽大學
• 主分類號: B01D15/10
• 分類號: B01D15/10;B01D15/42;A61K36/484
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本發明公開了一種使用NKA?9型大孔樹脂對甘草總黃酮粗提物進行純化的工藝，并研究了其對亞硝酸鹽的清除作用，屬于中草藥中黃酮類化合物分離純化技術領域。通過單因素實驗得到如上樣濃度、上樣粗提液、上樣體積、上樣速度、洗脫體積、洗脫速度等工藝參數。經NKA?9型大孔樹脂純化后的粗提物中甘草總黃酮含量由44.5%提高到57.8%，純化后的甘草總黃酮對亞硝酸鹽具有一定的清除作用。該方法易操作、工藝條件簡單、使用的溶劑無毒無害，純化后的產品對亞硝酸鹽具有清除作用，具有較好的實際應用價值。

技術領域

本發明屬于中草藥中黃酮類化合物分離純化技術領域，具體涉及一種使用NKA-9型大孔樹脂對甘草黃酮粗提物進行分離純化的工藝，并對亞硝酸鹽進行清除的研究。

背景技術

近些年來大量研究顯示甘草中的黃酮類化合物有著重要的生理活性，在抗HIV、抗腫瘤、抗炎、抗菌、鎮靜、鎮痛、抗黑色素瘤等方面均具有重要的藥理作用。由于甘草所含的天然成分種類復雜，因此在提取過程中不可避免的引入一系列雜質，導致甘草黃酮粗提物中總黃酮的含量較低，無法直接應用于實際生產之中，大大限制其發展。近些年大孔樹脂純化技術發展迅速，其原理是利用化合物與大孔樹脂之間吸附力的不同及不同物質分子量大小的差異來進行分離，因此被廣泛應用于各類天然產物的分離純化。利用大孔樹脂純化甘草總黃酮的報道很多，相關專利有：（1）專利號：CN 103623041 B，名稱：大孔樹脂對甘草提取液中黃酮分離純化方法，該專利正處于有效期；（2）專利號：CN 108261438 A，名稱：一種甘草黃酮組分的提取及純化方法，該專利正處于有效期。與以上相關專利不同，本專利首次選用NKA-9型大孔樹脂對甘草總黃酮進行純化，成功將甘草總黃酮純度提高到57.8%。并研究了其對亞硝酸鹽的清除作用，結果表明甘草總黃酮對亞硝酸鹽有很好的清除作用，甚至在低濃度時清除效果要優于對照的L-抗壞血酸。

發明內容

本發明提供了一種利用NKA-9型大孔樹脂對甘草總黃酮粗提物進行純化的方法，通過優化工藝參數，得到純化后的甘草總黃酮產品，并對其清除亞硝酸鹽能力進行了研究。其步驟為：

一、甘草總黃酮粗提物的制備

精確稱取甘草適量，用15～25倍量的60%～80%乙醇，回流提取2～3 h，得到甘草總黃酮粗提液，加入一定體積乙酸乙酯進行萃取，收集上層油相，減壓濃縮，所得粗提物干燥收集。

二、甘草總黃酮粗提物的純化

NKA-9型大孔吸附樹脂的靜態實驗：

（1）取甘草總黃酮粗品溶解后定容，取溶液5份，調節至不同pH，再分別加入一定量大孔樹脂，置于恒溫搖床反應，測定溶液吸光度（總黃酮含量采用NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH顯色法測定，下同）。

（2）取一定體積已知濃度甘草黃酮粗提物溶液，加入一定量大孔樹脂，置于恒溫搖床反應，每隔一定時間取1 mL溶液測定吸光度。

（3）取（2）中吸附飽和的樹脂若干，均分為五份，分別加入相同體積的不同濃度的乙醇進行解吸，測定解吸溶液吸光度。

（4）配制一定濃度的甘草總黃酮粗提物溶液，再稀釋為一系列濃度梯度的待測液，各加入一定量大孔樹脂，置于恒溫搖床反應一定時間，測定溶液吸光度。

NKA-9型大孔吸附樹脂的動態實驗：

（1）取一定量大孔樹脂處理后濕法裝柱（層析柱30 mm×16 mm)，樹脂床柱體積為1 BV。使用SK-500Ⅲ注射泵控制上樣速度，每0.5 BV收集一個樣品，測定吸光度（以上樣溶液濃度的1/10為泄露標準），繪制不同上樣速度下的大孔樹脂泄露曲線。

（2）取一定量大孔樹脂按上述動態實驗（1）中得到的最佳工藝條件下裝柱、上樣，使用SK-500Ⅲ注射泵控制洗脫速度，每0.5 BV收集一個樣品，測定吸光度。