[發明專利]一種蜂毒肽變體及其應用

有效

• 申請號: 201910854956.0
• 申請日: 2019-09-10
• 公開（公告）號: CN110498848B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 王晨軒;鄧準;于蘭蘭;張文博;祖瑞涓;鄭明睿
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;A61K38/17;A61P31/04;A61P35/00
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 李紅偉;孟祥斌

本發明涉及一種新型蜂毒肽變體及其應用。目前臨床上亟待開發出新型抗菌藥物以避免抗生素的過度使用，蜂毒肽作為一種優良的生物抗菌劑，是抗生素的最佳替代品之一。發明人基于研究發現一種新型蜂毒肽，該蜂毒肽對革蘭氏陰性菌具有很好的抑菌殺菌能力，并進一步通過序列改進獲得其變體，在保留野生型蜂毒肽抗革蘭氏陰性菌的基礎上，同時獲得更好的抑制革蘭氏陽性菌的能力。本發明提供的新型蜂毒肽及其變體具有很好的臨床應用前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種新型蜂毒肽變體及其應用。

背景技術

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是最常見的人類細菌病原體，屬于革蘭氏陽性球菌，可引起皮膚、軟組織感染、化膿性關節炎、心內膜炎、骨髓炎、肺炎，也可引起菌血癥、膿毒血癥等全身感染。最初，金黃色葡萄球菌對青霉素的敏感度在90％以上，但隨著抗生素的大量使用，耐青霉素的金黃色葡萄球菌也隨之出現，并且隨后也發現了對其他抗生素，如四環素、紅霉素等耐藥的金黃色葡萄球菌。很長一段時間內，治療耐藥性金黃色葡萄球菌感染沒有達到預期的效果。近年來出現了對甲氧西林、苯唑西林、頭孢拉定等多種抗生素耐藥，以及 mec基因陽性的耐藥性金黃色葡萄球菌，被命名為耐甲氧西林金黃葡萄球菌 (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)。MRSA是醫院院內感染的一種常見病原菌，其感染多見于外傷或手術后。2016年，國內主要地區醫院MRSA 的平均檢出率為38.4％，部分醫院的檢出率高達53.5％-75.3％，成為嚴重威脅國民生命健康的耐藥性病原菌。萬古霉素是目前對抗MRSA最好的抗生素，但隨著萬古霉素的過度使用，據報導，醫院院內分離的MRSA對萬古霉素的耐藥性正在逐年升高，這對開發新型抗菌藥物及材料提出了迫切要求。

抗菌肽作為一種優良的生物抗菌劑，是當前公認的抗生素的最佳替代品。蜂毒肽(melittin)是抗菌肽類的一種，由26個氨基酸殘基組成，其含量占蜂毒的40％以上蜂毒肽能與生物膜發生作用致使生物膜在物理生理性質上出現一系列改變。目前在臨床上用于治療血液及心血管系統疾病和神經痛等神經系統疾病等方面，有較為廣闊的前景。但是，野生型蜂毒肽對革蘭氏陽性菌的抑菌能力并不理想，考慮到傷口感染時，患者往往感染上的不止一種細菌，如果能在野生型蜂毒肽抗革蘭氏陰性菌的基礎上，獲得一種新型的對革蘭氏陽性菌也具備更強的抑菌殺菌能力，則可以更有效的清除病原體，有助于患者恢復健康。

本發明的目的在于，通過序列改進，發現一種新型蜂毒肽，在保留野生型蜂毒肽抗革蘭氏陰性菌的基礎上，同時獲得更好的抑制革蘭氏陽性菌的能力。此外，在腫瘤細胞毒性試驗中發現，本發明提供的新型蜂毒肽對腫瘤細胞也具有很好的殺傷作用。本發明提供的新型蜂毒肽變體具有很好的臨床應用前景。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新型蜂毒肽，蜂毒肽的序列為與野生型蜂毒肽 SEQNO ID.1有75％以上同源性的序列，所述SEQ NO ID.1序列為：GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ。

本發明的目的在于提供一種新型蜂毒肽，新型蜂毒肽在SEQ NO ID.1中的氨基酸上取代、缺失、添加一個或幾個氨基酸形成與上述蜂毒肽具有相同功能的新型蜂毒肽的變體。

進一步，新型蜂毒肽的變體序列為與GIGAVLRVLTTGLPALISWIRRRRQQ (SEQ NOID.2)有75％、80％、85％、90％、95％或100％以上同源性的序列。

目前，蜂毒肽有各種各樣的修飾形式，如連接上脂肪酸、氨基酸氟化、酰化以及用D型氨基酸代替L型氨基酸等，通過不同的修飾，使得多肽的活性提高、毒性降低、制備工藝簡化等。

進一步，上述新型蜂毒肽的N端被乙酰化修飾和/或C端被酰胺化修飾。

一種核苷酸片段，核苷酸片段編碼上述新型蜂毒肽。

一種重組載體，所述載體含有上述核苷酸片段。