[發(fā)明專利]大片形吸蟲分泌排泄產(chǎn)物診斷抗原的制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910854231.1
• 申請日: 2019-09-10
• 公開（公告）號: CN110514832B
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張為宇;侯林靜;吳文德;靳緯坤;吳正姣
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535;G01N33/68;G01N33/543;G01N33/96;C07K1/16;C07K1/14;C12N9/64;C07K14/78;C07K14/435;C12N9/08
• 代理公司: 北京天奇智新知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11340
• 代理人: 韋莎

本發(fā)明提供大片形吸蟲分泌排泄產(chǎn)物診斷抗原的制備方法與應(yīng)用，一種大片形吸蟲分泌排泄產(chǎn)物診斷抗原有效成分的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)大片形吸蟲分泌排泄產(chǎn)物制備；(2)層析組分收集；(3)層析組分的篩選。本發(fā)明還提供一種檢測/輔助大片形吸蟲病的試劑盒，所述試劑盒含有權(quán)利要求1所述的F22層析組分。本發(fā)明還涉及含有診斷抗原在檢測/輔助水牛大片形吸蟲病早期診斷中的應(yīng)用。本發(fā)明篩選出的F22層析組分作為大片形吸蟲分泌排泄產(chǎn)物診斷抗原具有檢測快速、操作簡便、易于判定等優(yōu)點(diǎn)，能夠?yàn)樗４笃挝x的檢測提供實(shí)用有效的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種診斷抗原，具體涉及一種大片形吸蟲分泌排泄產(chǎn)物(Fasciolagigantica Excretory-Secretory Products，F(xiàn)gESP)診斷抗原的制備方法及其含有該抗原的試劑盒與應(yīng)用。

背景技術(shù)

片形吸蟲(Fasciola spp.)屬于扁形動物門，吸蟲綱，復(fù)殖目，片形科，片形屬。片形屬中以肝片形吸蟲(Fasciola hepatica)和大片形吸蟲(Fasciola gigantica)兩種最為常見。

大片形吸蟲竹葉形，肩不明顯，末端鈍圓。體長25～50mm，體長與體寬3:1以上，腹吸盤約為口吸盤的1.5倍，睪丸分支復(fù)雜，占1/2，卵巢分支多。對大片形吸蟲的成蟲體被結(jié)構(gòu)進(jìn)行電鏡觀察，蟲體體表有體棘，蟲體可分為體被、肌層和細(xì)胞體層。片形吸蟲生活史過程包括蟲卵、毛蚴、胞蚴、雷蚴、尾蚴、囊蚴、童蟲和成蟲等階段，中間宿主為椎實(shí)螺科的淡水螺，終宿主主要為牛、羊等動物，也可寄生于人體，成蟲寄生在終宿主的肝臟和膽囊。寄生蟲在完成生活史的過程中，會產(chǎn)生大量的產(chǎn)物，包括寄生蟲代謝物，如腺體分泌物、消化道排泄物、幼蟲蛻皮液等；寄生蟲蟲體物，如寄生蟲發(fā)育過程脫落表膜、寄生蟲死亡時的降解物等。片形吸蟲排泄分泌排泄產(chǎn)物(Excretory-Secretory Products，ESP)含有很多寄生蟲在宿主體內(nèi)移行、定居、攝取營養(yǎng)和免疫逃避等起著重要作用的功能性蛋白分子，ESP組分在不同階段的作用功能不一樣。在片形吸蟲與反芻動物的關(guān)系中，不同種的動物對片形吸蟲易感性不同。

片形吸蟲病(Fascioliasis)是由片形吸蟲主要寄生于反芻動物的肝臟、膽管，引起的人畜共患寄生蟲病。肝片形吸蟲主要流行于中國北部、歐洲、澳大利亞等溫帶地區(qū)，偶爾出現(xiàn)在北非、中美洲、南美洲和中東，大片形吸蟲主要流行于中國南部、非洲、南亞等熱帶及亞熱帶地區(qū)，在亞洲和非洲部分地區(qū)兩種吸蟲均存在。

片形吸蟲病的診斷方法主要有病原學(xué)檢查、臨床診斷、分子生物學(xué)診斷、免疫學(xué)診斷等。免疫學(xué)診斷仍是目前診斷方法研究的重點(diǎn)。免疫診斷方法有變態(tài)反應(yīng)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、免疫膠體金滴滲法(Dig-ELISA)和生物素-親和素酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(BA-ELISA)等。血清學(xué)已經(jīng)成為診斷片形吸蟲最快、最有效的方法。ELISA技術(shù)因其靈敏、定量等特點(diǎn)在很大程度上取代了糞檢、其他寄生蟲檢測。檢測對象包括抗體和抗原；檢測的抗原有糞抗原、ES抗原、蟲卵抗原、循環(huán)抗原等。檢測的樣品包括血清、血漿、血紙、糞便和牛奶等。

常見的診斷抗原有ESP、肝片形吸蟲的提取物半胱氨酸蛋白酶Fas1、Fas2、肝片形吸蟲Cat L-1、大片形吸蟲Cat L-3、大片形吸蟲Cat L-1D、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GlutathioneS-transferase，GST)、SOD、MM3、CD59等。