[發明專利]百菌清抗獨特型單域抗體庫和抗獨特型單域抗體及其應用

在審

• 申請號: 201910838114.6
• 申請日: 2019-09-05
• 公開（公告）號: CN110577601A
• 公開（公告）日: 2019-12-17
• 發明（設計）人: 趙巖巖;趙圣明;王寶石;譚鳳玲;李紅波;周威;婁文娟
• 申請（專利權）人: 河南科技學院
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N15/70;C40B50/06;G01N33/53
• 代理公司: 11465 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙)
• 代理人: 王敏

本發明公開了一種百菌清抗獨特型單域抗體庫和抗獨特型單域抗體及其應用，屬于基因工程和免疫工程技術領域。本發明由百菌清單域抗體庫篩選獲得百菌清單域抗體后，再次免疫小鼠，取其脾臟提取RNA，利用噬菌體展示技術，以大腸桿菌TG1為宿主菌，構建百菌清抗獨特型單域抗體庫。本發明利用噬菌體篩選技術對該抗體庫進行篩選，獲得與百菌清具有競爭結合活性的抗獨特型單域抗體，并且節約了抗體制備的成本，容易制備大量抗體，還方便了以后對已獲得抗體的改造；為百菌清的檢測提供了綠色免疫檢測方法，減少檢測方法對操作人員的危害，減少了有機物質的使用，具有十分廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及基因工程和免疫工程技術領域，更具體的說是涉及一種百菌清抗獨特型單域抗體庫和抗獨特型單域抗體及其應用。

背景技術

百菌清是一種取代苯類殺菌劑，化學名稱2,4,5,6-四氯-1,3-苯二甲腈，分子式C₈Cl₄N₂。百菌清的作用機制主要是破壞真菌細胞的三磷酸甘油醛脫氫酶活性，使其正常的新陳代謝受到破壞，被廣泛的應用于蔬果、谷物及經濟作物上的真菌病害防治。百菌清具有一定的急性和慢性毒性，在環境中較穩定，具有明顯的蓄積毒性。由于百菌清的廣泛使用，其殘留問題也引起了廣泛的關注。

農藥小分子的檢測除了采用精密儀器檢測，還可以采用免疫分析方法，精密儀器檢測靈敏度和準確度都很高，但是，樣品前處理復雜，對設備要求高，檢測成本高，對大量樣品進行檢測時優勢不明顯；免疫分析方法正好可以彌補精密儀器檢測的不足之處，實現對樣品快速、經濟、高通量的檢測。抗體是免疫分析的重要組成部分，完整的抗體有兩條重鏈和兩條輕鏈構成，重輕鏈的可變區對抗原的結合起到了關鍵的作用。除了完整的抗體，抗體的片段如Fab、scFv、DAB，也可用于免疫檢測。

抗體決定簇有三種：同種型、同種異型和獨特型。同種型決定了抗體型與亞型；同種異型決定了種間抗體的多樣性；獨特型決定了與不同抗原的結合特異性。1963年Oudin等發現了一種既不同于同種型，也不同于同種異型的抗原決定簇，將其稱為idiotype，意為個體基因型，現譯為獨特型。1974年丹麥學者Jerne提出了免疫網絡學說，機體受到外來抗原刺激，淋巴細胞被激活，產生抗體Ab1，隨之識別Ab1的淋巴細胞被激活，產生抗獨特型抗體Ab2，還可以有Ab3、Ab4等抗體產生，在體內構成了復雜的Id與anti-Id網絡。能夠識別Ab1獨特型決定簇的Ab2即為抗原的抗獨特型抗體。抗獨特型抗體在免疫分析方法中可以被用作抗原或標準物的替代品，建立綠色免疫分析方法，為抗原合成提供了新途徑。抗獨特型抗體類型有三種：多克隆抗體、單克隆抗體、基因工程抗體。噬菌體展示技術是目前比較成熟、應用相對廣泛的基因抗體技術。20世紀80年代，噬菌體展示技術逐步建立并發展起來，該系統可以將抗體基因表達在重組噬菌體衣殼蛋白的表面，通過多輪親和篩選，分離獲得目的抗體。

噬菌體展示技術的優勢主要體現在基因型與表型的統一，噬菌體展示技術以噬菌體或噬菌粒為載體，將外源多肽或蛋白質基因整合到噬菌體基因組中，外源基因以融合形式表達并展示在噬菌體的表面，實現了對蛋白(表型)和基因型的同步篩選。但是，目前關于百菌清抗獨特型抗體庫的構建研究尚屬空白；因此，提供一種百菌清抗獨特型單域抗體庫和抗獨特型單域抗體及其應用是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種百菌清抗獨特型單域抗體庫和抗獨特型單域抗體及其應用，為百菌清的免疫檢測提供一種百菌清抗獨特型單域抗體庫，利用篩選獲得的抗獨特型單域抗體建立百菌清的綠色免疫檢測方法。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明中百菌清單域抗體是以百菌清-NH₂-KLH作為免疫原免疫小鼠，構建鼠源重鏈抗體庫，以百菌清-OH-OVA作為包被原篩選獲得。