[發(fā)明專(zhuān)利]卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910822274.1
• 申請(qǐng)日: 2019-09-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110684097A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄺春曼;譚志堅(jiān);黃儀娟;劉麗丹;翁亞彪;王新秋
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 佛山市正典生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/44
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/44;C12N15/70;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 44205 廣州嘉權(quán)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 左恒峰

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白及其制備方法；所述卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白具有的氨基酸序列為MBP?R7。本發(fā)明人工合成了卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7基因及制備卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)純化、體外活性檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白具有檢測(cè)卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)抗體的作用，在檢測(cè)卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)病中，用重組R7蛋白代替第二代裂殖體作為包被抗原，檢測(cè)效果更好，更快速便捷；由于重組R7蛋白更易制備，因此降低了抗原獲取的難度和成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白及其制備方法。

背景技術(shù)

雞卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)病又稱(chēng)“白冠病”，是由卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)寄生于雞的紅細(xì)胞、白細(xì)胞和內(nèi)臟組織細(xì)胞內(nèi)所引起的一種血孢子蟲(chóng)病。雞卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)病多發(fā)生于3～6周齡雛雞，發(fā)病嚴(yán)重，死亡率高；青年雞感染率比雛雞高，但是死亡率不高；而成年雞的感染率最高，但死亡率很低，癥狀較輕。主要臨床癥狀表現(xiàn)為雞冠蒼白，消瘦，拉水樣白色或綠色稀糞，雞發(fā)育受阻，成年雞產(chǎn)蛋下降甚至停止，會(huì)對(duì)養(yǎng)雞行業(yè)造成較大經(jīng)濟(jì)損失。

根據(jù)臨床癥狀、流行病學(xué)、病理解剖等診斷方法可對(duì)卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)病作出初步判斷，而確診一般采用血涂片檢查方法，檢查外周血液中有無(wú)裂殖子或配子體。出現(xiàn)在外周血液中裂殖子體積極小，普通光學(xué)顯微鏡下難以鑒別卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)裂殖子與其他血孢子蟲(chóng)的裂殖子，容易誤診。并且卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)成熟配子體在外周血液中出現(xiàn)的時(shí)間晚且持續(xù)的時(shí)間短，血涂片檢查容易漏檢。血涂片檢查方法雖然簡(jiǎn)單易行，但是在檢測(cè)效率、檢出率、蟲(chóng)種鑒別等方面具有很大的局限性，越來(lái)越不適應(yīng)當(dāng)前防治工作的需要，尤其不能適應(yīng)大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查。

而采用抗原—抗體反應(yīng)來(lái)檢測(cè)雞卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)病是目前探索的方向，抗原—抗體反應(yīng)的特點(diǎn)主要有四性：即特異性、比例性、可逆性，階段性。因此，提供一種卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白來(lái)檢測(cè)重組卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)抗體是很有必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白及其制備方法，該卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白代替卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)第二代裂殖體作為包被抗原易制備，成本低。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

發(fā)明人用原核表達(dá)的重組R7蛋白包被酶標(biāo)板，建立檢測(cè)抗卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)抗體的ELISA方法。R7蛋白是卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)第二代裂殖體的一種外膜抗原。基于卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白的ELISA檢測(cè)方法比瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、血涂片檢查法等更加靈敏和方便快捷，可以檢測(cè)出雞感染卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)后產(chǎn)生的抗體和接種重組R7油佐劑疫苗后產(chǎn)生的抗體。為我國(guó)廣大的養(yǎng)殖場(chǎng)卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)病的防控提供幫助。

一種卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白，所述卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)重組R7蛋白具有的氨基酸序列為MBP-R7。

所述MBP-R7：