[發明專利]融合蛋白及其制備得到的藥物和編碼基因以及含有該基因的MSC

有效

• 申請號: 201910812884.3
• 申請日: 2019-08-30
• 公開（公告）號: CN110467680B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 賈永前;吳鵬強;王甫玨;王永生
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K38/21;A61K47/64;A61P37/06
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 郭艷艷

本發明公開了一種融合蛋白及其制備得到的藥物和編碼基因以及含有該基因的MSC。該融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；該基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本發明制備得到的間充質干細胞能過表達IDO及iNOS數十萬倍，體內外均能明顯抑制Th17細胞的比例，提高Treg細胞比例，能明顯調節Th17/Treg軸，明顯降低異基因造血干細胞移植小鼠aGVHD發生率及aGVHD相關的死亡率。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種融合蛋白及其制備得到的藥物和編碼基因以及含有該基因的MSC。

背景技術

異基因造血干細胞移植(allogeneic hematopoietic stem celltransplantation,allo-HSCT)的主要特征是供者T淋巴細胞、樹突狀細胞的激活，通過免疫機制，最大化地消滅受者殘存的白血病細胞，以期達到移植物抗白血病效應(graft-versus-leukemia,GVL)，而供者T細胞與樹突狀細胞在受者體內激活，常會引起急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)，是最嚴重的并發癥，常常會提高allo-HSCT死亡率。其發生機理主要是T輔助細胞17(Th17)比例增高，而T調節細胞(Treg)比例降低導致Th17/Treg軸比例失調。而目前針對aGVHD的治療推薦主要在allo-HSCT后的預防，藥物包括環孢霉素A、甲氨蝶呤、抗胸腺細胞球蛋白等；而針對已經發生的aGVHD一線用藥推薦為甲基強的松龍，二線治療包括嗎替麥考酚酯膠囊、甲氨蝶呤、他克莫司、抗TNF抗體、間充質干細胞(mesenchymal stem cell,MSC)輸注等，治療效果仍較差。

發明內容

針對現有技術中的上述不足，本發明提供一種融合蛋白及其制備得到的藥物和編碼基因以及含有該基因的MSC，可通過調節異基因造血干細胞移植機體Th17/Treg比例，減少aGVHD的病理損傷，降低異基因造血干細胞移植后aGVHD的致死率。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種融合蛋白，該融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

進一步地，該融合蛋白由SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列通過分子克隆的方法融合而成。

編碼上述融合蛋白的基因，該基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

進一步地，該基因的核苷酸序列為如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列經取代、缺失和/或添加一個或多個核苷酸，且能編碼相同功能蛋白質的核苷酸序列。

含有上述基因的重組質粒。

含有上述基因的間充質干細胞，該間充質干細胞的具體制備過程如下：

(1)將該基因與載體連接，制得重組質粒pWPXLd-IFNG-IFNGR1；

(2)提取重組質粒pWPXLd-IFNG-IFNGR1 DNA，并進行慢病毒包裝，然后再感染間充質干細胞即可。

用于治療aGVHD的藥物，包括上述融合蛋白，以及藥學上可接受的載體。

本發明的有益效果為：

本發明制備得到的間充質干細胞能過表達IDO數十萬倍，體內外均能明顯抑制Th17細胞的比例，提高Treg細胞比例，能明顯調節Th17/Treg軸，明顯降低異基因造血干細胞移植小鼠aGVHD發生率及aGVHD相關的死亡率。

附圖說明

圖1為電泳檢測結果圖；