[發明專利]一種快速V-P試驗法以及用于該方法的試劑盒

在審

• 申請號: 201910769984.2
• 申請日: 2019-08-20
• 公開（公告）號: CN110551792A
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發明（設計）人: 馬玥;周浩
• 申請（專利權）人: 馬玥
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 11139 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 馬鑫

本發明公開了一種快速V?P試驗法以及用于該方法的試劑盒。所述的快速V?P試驗法，包括以下步驟：(1)將試驗菌種接種于改良MR?VP肉湯培養基中，37℃保溫3?4h，哈夫尼亞菌在22?25℃保溫；(2)保溫結束后往培養基中依次加入A液2滴，B液3滴，C液2滴，充分混合2?5min，呈現紅色判定為陽性；若無紅色出現，置于室溫或37℃恒溫箱，15min內仍不顯現紅色、判定為陰性。其中，A液為0.5％w/w肌酸溶液；B液為含5％w/wα?萘酚(1?naphthol)的95％(w/w)酒精溶液；C液為40％w/v氫氧化鉀水溶液。該方法加快了出現陽性反應的速度，3?4h即可判讀結果。增強顯色效果，鮮明直觀。可同時適用于腸桿菌科和微球菌科細菌的檢測，沒有對待檢菌落的特殊要求。培養基、試劑用量少，價格低廉；配方簡單，性能穩定。

技術領域

本發明涉及一種V-P試驗法，還涉及用于該方法的試劑盒。本發明屬于微生物檢測技術領域。

背景技術

腸桿菌科和微球菌科細菌屬種繁多、分布廣泛、寄主范圍大，有幾十個與醫學有關的菌屬，占臨床分離菌總數的50％，將近50％的敗血癥、70％以上的泌尿道感染是由此類菌引起的，另外由其引起的食物中毒事件已成為世界性的公共衛生問題，是人類健康的潛在殺手，如何避開設備條件的限制，利用快速簡便的生化試驗實現對腸桿菌科和微球菌科細菌的屬種快速鑒別，是我們需要研究攻破的重點課題。

V-P試驗，又名二乙酰試驗。其原理是某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸脫羧產生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在堿性環境中，被空氣中的氧氧化為二乙酰，進而與培養基內蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色化合物，則為V-P試驗陽性。V-P試驗可以用于以下用途：

①腸桿菌屬與埃希菌屬，葡萄球菌屬與微球菌屬的屬間鑒別；

②肺炎克雷伯菌、產酸克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌、鼻硬結克雷伯菌間的菌種鑒別；

③蜂房哈夫尼亞菌與小腸結腸炎耶爾森菌及單核細胞增生李斯特菌的菌種鑒定。

國內外常用的V-P試驗法有：O’Meara氏法、Barritt氏法、Coblentz氏法等，其中最快要24h，慢的要4天才能得出檢測結果；在檢測芽胞桿菌和葡萄球菌等其它細菌時，通用培養基中的磷酸鹽會阻礙乙酰甲基甲醇的產生，造成假陰性結果；另外有些方法僅能檢測產酸的培養物。不但檢測時間長，試劑不穩定，適用范圍也受到限制。

鑒于此種現狀，本發明建立了一種快速V-P試驗法，在保證結果可靠性的同時解決了以往方法存在的問題和不足。快速V-P試驗法的先進性在于：1、加快了出現陽性反應的速度，3-4h即可判讀結果。2、增強顯色效果，鮮明直觀。3、同時適用于腸桿菌科和微球菌科細菌的檢測，沒有對待檢菌落的特殊要求。4、培養基、試劑用量少，價格低廉；配方簡單，性能穩定。

發明內容

本發明的目的在于建立一種快速V-P試驗法以及用于該方法的試劑盒。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

本發明的一種快速V-P試驗法，包括以下步驟：

(1)將試驗菌種接種于改良MR-VP肉湯培養基中，37℃保溫3-4h，哈夫尼亞菌在22-25℃保溫；

所述的改良MR-VP肉湯通過以下方法制備：酵母膏1g、植物胨5g、多胨7g、氯化鈉5g、葡萄糖10g、瓊脂5g，加蒸餾水1000ml，調節pH7.0，121℃15min滅菌，試管分裝；

(2)保溫結束后往培養基中依次加入A液2滴，B液3滴，C液2滴，充分混合2-5min，呈現紅色判定為陽性；若無紅色出現，置于室溫或37℃恒溫箱，15min內仍不顯現紅色、判定為陰性；