[發明專利]醋酸蘭瑞肽的合成方法

有效

• 申請號: 201910735754.4
• 申請日: 2019-08-09
• 公開（公告）號: CN110330560B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 李九遠;李常峰;荊祿濤;朱自力
• 申請（專利權）人: 凱萊英生命科學技術(天津)有限公司
• 主分類號: C07K14/655
• 分類號: C07K14/655;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 白雪

1.一種醋酸蘭瑞肽的合成方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1，以Fmoc保護的氨基樹脂為固相合成的載體，將其按照氨基酸順序依次與以下Fmoc保護的氨基酸Fmoc-Thr(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH及Fmoc-D-2-Nal-OH進行縮合反應，得到Fmoc保護多肽樹脂；

S2，切割所述Fmoc保護多肽樹脂中的樹脂，得到線性肽鏈；

S3，將所述線性肽鏈溶解在第一溶劑中，形成肽鏈溶解液，其中，所述肽鏈溶解液的濃度為200～300mg/ml；將所述肽鏈溶解液以滴加的方式加入至氧化劑體系中，以進行合環反應，形成合環產物，其中，所述氧化劑體系與所述肽鏈溶解液的體積比為4～10:1，所述肽鏈溶解液的滴加速度為1～60ml/min，且采用HPLC監控反應進程；

S4，脫除所述合環產物的側鏈Fmoc保護基，得到蘭瑞肽；

S5，對所述蘭瑞肽進行醋酸胺轉鹽，得到所述醋酸蘭瑞肽。

2.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述步驟S1包括：

溶脹步驟：對所述Fmoc保護的氨基樹脂進行溶脹，得到溶脹樹脂；

脫保護步驟：對所述溶脹樹脂進行Fmoc脫保護，得到活性樹脂；

氨基酸活化步驟：將所述Fmoc-Thr(OtBu)-OH在縮合體系中活化，得到活化氨基酸；

縮合步驟：將所述活性樹脂與所述活化氨基酸進行縮合反應，蔭三酮監控反應終點，得到第一縮合產物；

氨基酸依次連接：對所述第一縮合產物分別循環執行所述脫保護步驟、所述氨基酸活化步驟及所述縮合步驟，以依次將所述Fmoc-Cys(Trt)-OH、所述Fmoc-Val-OH、所述Fmoc-Lys(Boc)-OH、所述Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、所述Fmoc-Tyr(tBu)-OH、所述Fmoc-Cys(Trt)-OH及所述Fmoc-D-2-Nal-OH縮合連接至所述第一縮合產物上，得到所述Fmoc保護多肽樹脂。

3.根據權利要求2所述的合成方法，其特征在于，針對不同的所述Fmoc保護的氨基酸，各所述氨基酸活化步驟中采用的所述縮合體系分別獨立地選自以下A/B體系中的一種：HOBT/DIC、HOAT/DIC、Oxymapure/DIC、HATU/DIPEA、HBTU/DIPEA、TBTU/DIPEA或PyBOP/DIPEA。

4.根據權利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述氨基酸活化步驟中，先將待反應的所述Fmoc保護的氨基酸與縮合劑、第二溶劑混合并溶解，得到混合溶液，所述縮合劑為Oxymapure；然后將所述混合溶液降溫至0～5℃，再向其中加入活化劑，活化5～10min后，得到所述活化氨基酸，所述活化劑為DIC。

5.根據權利要求3所述的合成方法，其特征在于，針對各所述Fmoc保護的氨基酸的縮合反應過程中，所述Fmoc保護的氨基酸、所述縮合體系及反應對應的Fmoc樹脂之間的摩爾比為2～5:2～5:1，且所述Fmoc樹脂的摩爾數以其攜帶的Fmoc保護氨基的摩爾數計。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的合成方法，其特征在于，各縮合反應過程中，反應溫度為10～35℃，反應時間為0.5～4h。

7.根據權利要求1至5中任一項所述的合成方法，其特征在于，所述步驟S3中，所述氧化劑體系為以下體系中的任一種：碘的DCM溶液、鐵氰化鉀的水溶液、H₂O₂的水溶液、通有空氣或氧氣的DMSO。