[發明專利]一種用于單精子冷凍保存的空心瓊脂糖球及制備方法

在審

• 申請號: 201910725118.3
• 申請日: 2019-08-07
• 公開（公告）號: CN110367243A
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發明（設計）人: 李博;陳書強;蘆潔;李麗;唐娜
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙) 11531
• 代理人: 于鵬

本發明涉及一種用于單精子冷凍保存的空心瓊脂糖球及制備方法，該空心瓊脂糖球的制備是：步驟1)取10ml的海藻酸和碳酸鈣的水溶液與20ml的含有卵磷脂及醋酸的石蠟油混合，得混合液；步驟2)將步驟1)的混合液過150目篩網，得到直徑在60–100μm的海藻膠小球；步驟3)將海藻膠小球加入10ml質量百分比濃度為1％的瓊脂糖溶液中，加熱沸騰；步驟4)將步驟3)含海藻膠小球的瓊脂糖溶液注入到磁力攪拌的10ml石蠟油中，形成瓊脂糖小球，待瓊脂糖小球冷卻后過150目篩網得到直徑在80–120μm的瓊脂糖小球；步驟5)將直徑在80–120μm的瓊脂糖小球用清水洗凈后加入50ml的檸檬酸溶液，檸檬酸溶液將瓊脂糖小球中的海藻膠溶解后得到空心瓊脂糖球。本發明簡便有效。

技術領域

本發明涉及醫學領域，具體涉及一種用于單精子冷凍保存的空心瓊脂糖球及制備方法。

背景技術

隨著環境污染日趨嚴重、激素濫用等導致男性精子質量和數量不斷下降，男性不育比例日益增高，其中將近60％-75％的男性不育患者表現為少精子、弱精子、無精子癥等。目前，臨床上對于嚴重男性不育患者采用的基本策略都是先將取到的精子冷凍保存，然后再女方取卵當日解凍后挑選存活精子進行ICSI治療。但由于精子數量太少，活力太差，所以對于精子的冷凍保存，目前在世界范圍內仍然是個難題。

發明內容

本發明的目的是：針對現在有存在的問題，提供了一種用于單精子冷凍保存的空心瓊脂糖球及方法。本發明利用空心瓊脂糖球模擬空透明帶作為載體進行精子冷凍，能有效簡便的保存單個或微量精子，而且冷凍精子解凍后具有較高的精子回收率與存活率。

本發明的技術方案是：一種用于單精子冷凍保存的空心瓊脂糖球，該空心瓊脂糖球的制備是：

步驟1)取10ml的海藻酸和碳酸鈣的水溶液與20ml的含有卵磷脂及醋酸的石蠟油混合，得混合液；其中，水溶液中海藻酸為3％，碳酸鈣為0.6％；石蠟油中卵磷脂為3％，醋酸為0.5％；上述百分比均為質量百分比；

步驟2)將步驟1)的混合液過150目篩網，得到直徑在60–100μm的海藻膠小球；

步驟3)將步驟2)的海藻膠小球加入10ml質量百分比濃度為1％的瓊脂糖溶液中，加熱沸騰；

步驟4)將步驟3)含海藻膠小球的瓊脂糖溶液注入到磁力攪拌的10ml石蠟油中，形成瓊脂糖小球，待瓊脂糖小球冷卻后過150目篩網得到直徑在80–120μm的瓊脂糖小球；

步驟5)將直徑在80–120μm的瓊脂糖小球用清水洗凈后加入50ml的檸檬酸溶液，檸檬酸溶液將瓊脂糖小球中的海藻膠溶解后得到空心瓊脂糖球。

所述步驟4)含海藻膠小球的瓊脂糖溶液是通過1ml針管進行注入。

一種用于單精子冷凍保存的方法，利用上述所述的用于單精子冷凍保存的空心瓊脂糖球，通過持針將該空心瓊脂糖球固定，將篩選的精子注射入到空心瓊脂糖球中；將內有精子的空心瓊脂糖球，轉移至冷凍載桿上；然后將裝有空心瓊脂糖球的冷凍載桿，置于液氮泡沫盒上方10cm處開始熏蒸，經5min逐漸下降至液氮蒸汽內，再靜置1min后，將冷凍載桿投入液氮，可長期保存。

所述的一種用于單精子冷凍保存的方法，具體包括如下步驟：

步驟S1：精子冷凍皿的制備

精子冷凍皿的制備：皿內包含一個PVP滴和數個精子注射滴，以及一個平鋪的精子篩選滴，在無CO₂的37℃培養箱內過夜平衡，備用；其中，數個精子注射滴是用含10％SSS的m-HTF做成的液滴；

步驟S2：精子冷凍液的準備

不含蛋黃的精子冷凍液以1：1的比例用含10％SSS的mHTF稀釋而成；

步驟S3：精子解凍液的準備