[發明專利]重組人促卵泡激素及其制備方法

有效

• 申請號: 201910704414.5
• 申請日: 2019-07-31
• 公開（公告）號: CN110305903B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 彭紅衛;張玉晶;張磊;王沖;葉凡;俞峻紅;趙家跟;李曉鵬;俞亞波
• 申請（專利權）人: 江蘇璟澤生物醫藥有限公司;上海景澤生物技術有限公司;成都景澤生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/16;C07K14/59;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/16
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;崔佳佳

1.一種重組促卵泡激素的制備方法，其特征在于，包括，

(1)將用于表達FSHα亞基的第一表達盒和用于表達FSHβ亞基的第二表達盒可操作地插入真核表達載體PGM中，獲得能表達FSHα亞基蛋白和FSHβ亞基蛋白的轉染載體PGM/rhFSH，其中，在第一表達盒中用于編碼FSHα亞基的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，在第二表達盒中用于表達FSHβ亞基的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述載體PGM/rhFSH如下：

(2)將所述轉染載體轉入真核細胞，從而獲得染色體中整合有所述第一表達盒和第二表達盒的經轉化的真核細胞；

(3)在適合表達的條件下，培養所述的經轉化的真核細胞，表達所述的FSHα亞基和FSHβ亞基,從而獲得含重組促卵泡激素的發酵產物；

(4)對所述發酵產物進行分離純化，從而制得重組促卵泡激素；其中，所述的真核細胞是CHO-DG44細胞株；所述重組促卵泡激素的比活性高于12200IU/mg；純度99.90％；并且，

在步驟(4)中，包括步驟：對所述發酵產物的上清液依次進行：

(b1)硫酸銨沉淀；

(b2)疏水相互作用色譜法(HIC)；

(b3)低PH孵育滅活病毒；和

(b4)反相色譜層析(RPC)；

(b5)凝膠過濾層析(GFC)。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所獲得的重組促卵泡激素的純度大于99.99％。

3.權利要求1所述的重組促卵泡激素的制備方法，其中，FSHα亞基的氨基酸序列如SEQID NO：1所示。

4.權利要求1所述的重組促卵泡激素的制備方法，其中，FSHβ亞基的氨基酸序列如SEQID NO：2所示。

5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)進一步包括一個或多個超濾和/或納米過濾步驟。

6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中不進行免疫親和純化。

7.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中不進行凝集素親和純化。

8.可用于權利要求1所述的重組促卵泡激素的制備方法中的中間體，其特征在于，選自下組：

(i)載體PGM/rhFSH，其包含FSHα亞基基因和FSHβ亞基基因的基因，其中FSHα亞基基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，而FSHβ亞基基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

(ii)細胞，其轉染入了(i)所述的載體PGM/rhFSH；其中所述細胞是CHO-DG44細胞；或

(iii)細胞上清液，其為培養(ii)所述的細胞所得的上清液。