[發(fā)明專利]6個懷遠(yuǎn)石榴優(yōu)良品種的SSR指紋圖譜及其構(gòu)建方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910631034.3
• 申請日: 2019-07-12
• 公開（公告）號: CN110283930B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐義流;秦改花;劉春燕;黎積譽;高正輝;齊永杰;潘海發(fā);伊興凱;張曉玲
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 杭州奧創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33272
• 代理人: 趙梅

本發(fā)明公開6個懷遠(yuǎn)石榴優(yōu)良品種的SSR指紋圖譜，6個懷遠(yuǎn)石榴優(yōu)良品種分別為：白玉石籽、大笨子、紅粉皮、紅玉石籽、瑪瑙籽、晶花玉石籽；SSR指紋圖譜是基于8對SSR引物構(gòu)建的指紋圖譜，8對SSR引物分別為：PG080、PG130、PG139、PG152、PG098、PG077、PG090、PG093，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1?16所示，構(gòu)建的6個品種的SSR指紋圖譜特征如表1所示。本發(fā)明還公開了其構(gòu)建方法及其應(yīng)用。本發(fā)明為6個石榴品種的真?zhèn)舞b定、育種利用和新品種權(quán)利保護提供了理論依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及6個懷遠(yuǎn)石榴優(yōu)良品種的SSR指紋圖譜及其構(gòu)建方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

石榴是古老的保健水果，果實富含花青苷、黃酮、安石榴苷等多酚類物質(zhì)，特別是安石榴苷等鞣花單寧類物質(zhì)臨床醫(yī)用和保健價值高，具有潛在的抗氧化、抗癌、抗菌等功能，被譽為超級水果，被劃為國家規(guī)劃特色經(jīng)濟林樹種之一。據(jù)記載，石榴在我國已有2000多年的栽培歷史，在長期的栽培過程中，形成了眾多具有地方特色的優(yōu)良石榴品種。安徽懷遠(yuǎn)是我國四大傳統(tǒng)石榴產(chǎn)區(qū)之一，玉石籽、瑪瑙籽等優(yōu)良品種聞名遐邇。懷遠(yuǎn)石榴籽粒晶瑩剔透、風(fēng)味醇厚，深受消費者青睞。

石榴是多年生果樹，對石榴優(yōu)良品種的保存主要采取無性繁殖的方法。由于石榴獨特的經(jīng)濟、生態(tài)效應(yīng)，近年來石榴產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展，在我國果樹產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整中發(fā)揮了重要的作用。石榴在不同地域間引種和品種交換頻繁，常常導(dǎo)致品種混雜，同物異名或同名異物現(xiàn)象嚴(yán)重，對石榴品種資源的保存、鑒定與利用都十分不利，對雜交育種中親本的選配及系譜分析也有不利影響。生產(chǎn)中，品種純正是保證高效栽培的條件。因此明確品種的指紋圖譜，對石榴資源的保存、鑒定及利用均有重要的現(xiàn)實意義。分子標(biāo)記可以直接檢測不同品種或個體在DNA分子水平上的差異，具有較高的多態(tài)性和個體特異性，且不受環(huán)境和生長階段影響，能鑒定形態(tài)標(biāo)記所難以鑒定的個體。因此，開發(fā)可靠的分子標(biāo)記并構(gòu)建石榴指紋圖譜，對石榴快速鑒定具有重要意義。

白玉石籽、大笨子、紅粉皮、紅玉石籽、瑪瑙籽、晶花玉石籽是安徽懷遠(yuǎn)的6個優(yōu)良的主栽石榴品種，由于其性狀優(yōu)良，商品價值高，在苗木生產(chǎn)、果品銷售以及引種過程中常有以次充好現(xiàn)象存在，因此建立這6個優(yōu)良石榴品種的指紋圖譜，對科學(xué)合理利用這些品種具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明第一方面提供了6個懷遠(yuǎn)石榴優(yōu)良品種的SSR指紋圖譜，6個懷遠(yuǎn)石榴優(yōu)良品種分別為：白玉石籽、大笨子、紅粉皮、紅玉石籽、瑪瑙籽、晶花玉石籽；

SSR指紋圖譜是基于8對SSR引物構(gòu)建的指紋圖譜，8對SSR引物分別為：PG080、PG130、PG139、PG152、PG098、PG077、PG090、PG093，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO.1-16所示；

利用該8對引物構(gòu)建的6個懷遠(yuǎn)石榴優(yōu)良品種的SSR指紋圖譜特征如表1所示：

表1 6個懷遠(yuǎn)石榴優(yōu)良品種的SSR指紋圖譜

本發(fā)明第二方面提供了上述6個懷遠(yuǎn)石榴優(yōu)良品種的SSR指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括如下步驟：

(1)采用CTAB法提取DNA，加入50μL 0.1M的TE緩沖液，溶解過夜，-20℃保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)采用8對引物，以提取DNA為模版，進行PCR擴增，PCR擴增采用20μL的反應(yīng)體系，含1.0ng DNA，0.4μM正向引物，0.4μM反向引物，4mM MgCl₂，400μM dNTPs，1.0U Taq-DNA酶，加ddH₂0至總體積20μL，PCR采用touchdown反應(yīng)，反應(yīng)條件如下：5min，95℃；接下來11個循環(huán)，每個循環(huán)后退火溫度下降0.8℃{30s，95℃；30s，65℃；50s，72℃}；22個循環(huán){30s，95℃；30s，55℃；50s，72℃}；最后72℃延伸8min；