[發明專利]一種豬源衍生雜合抗菌肽MDP-2及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910629136.1
• 申請日: 2019-07-12
• 公開（公告）號: CN110283253B
• 公開（公告）日: 2020-04-10
• 發明（設計）人: 馬清泉;孟慶維;李鋒;陳志輝;單安山;朱佳良
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K38/17;A61P31/04
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務所有限責任公司 23101
• 代理人: 吳振剛

本發明提供一種豬源衍生雜合抗菌肽MDP?2及其制備方法和應用，其序列如序列表SEQ ID No.2所示。本發明根據抗菌肽PMAP?23或PMAP?36的氨基酸組成特點和分布，將天然抗菌肽進行截短和殘基替換，得到豬源衍生肽；將衍生肽與髓樣分化蛋白?2的脂多糖綁定序列相互連接，以進一步增強衍生肽的細菌靶定能力，最后獲得氨基酸長度從20至24不等的4條衍生雜合肽；然后合成多肽；進行純化、鑒定；最后，通過最小抑菌濃度和溶血試驗測定衍生抗菌肽的抑菌活性和細胞毒性，篩選具有較理想活性的多肽。本發明的有益效果：該多肽屬于天然衍生物，安全性較好，具有廣譜抗菌活性和低毒性；制備方法和技術成熟，合成成本低。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種豬源衍生雜合抗菌肽MDP-2及其制備方法和應用。

背景技術

自上個世紀抗生素發明以來，其在動物養殖生產中占據著重要的地位，為預防和治療畜禽疾病、保證畜禽健康發揮重要的作用。但隨著抗生素的不斷應用，許多問題也逐漸顯現；尤其是不規范使用和濫用導致超級細菌的出現，耐藥性細菌使得畜牧產業陷入恐慌，同時停藥期不當也使得畜產品品質下降、藥物殘留不達標，影響了消費者健康和食品安全。繼上個世紀末瑞典等國家開始逐漸禁用某些抗生素，現在許多國家紛紛出臺政策限制抗生素的飼用，這就為抗生素的替代提出了新的挑戰和課題。人們紛紛尋找抗生素替代物，其中益生菌、中草藥、抗菌肽等備受關注；其中抗菌肽是動物機體天然免疫的重要組成部分，天然無毒且擁有獨特的不同于傳統抗生素的物理破膜殺菌機制脫穎而出。天然抗菌肽具有疏水性和正凈電荷的特點，氨基酸殘基長度從十以下到幾十不等。

豬源抗菌肽種類較多，其中髓源抗菌肽PMAP-23和PMAP-36研究較為廣泛。但是，這兩種抗菌肽的抗菌活性和細菌靶定能力還不強，且還具有一定的細胞毒性等問題，因此限制了它們在實際生產中的應用。

發明內容

基于以上不足之處，本發明的目的在于提供一種豬源衍生雜合抗菌肽MDP-2，其序列如序列表SEQ ID No.2所示，該衍生雜合肽源自豬防御肽，屬于天然抗菌肽的衍生物，安全性較好，具有廣譜抗菌活性和低毒性。

本發明的另外一個目的在于提供一種豬源衍生雜合抗菌肽MDP-2的制備方法，制備方法和技術成熟，合成成本低，方法步驟如下：

(1)根據cathelicidin家族抗菌肽PMAP-23或PMAP-36的氨基酸組成特點和分布，將天然抗菌肽進行截短和殘基替換，得到豬源衍生肽；將豬源衍生肽與髓樣分化蛋白-2的脂多糖綁定序列FSKGKYKCV相互連接，以進一步增強豬源衍生肽的細菌靶定能力，最后獲得氨基酸長度從20至24不等的4條豬源衍生雜合肽MDP-1，MDP-2，MDP-3和MDP-4，其序列分別如序列表SEQ ID No.1-4所示；

(2)采用固相化學合成法，通過多肽合成儀合成這幾條多肽；

(3)將合成的多肽使用反相高效液相色譜進行純化，并利用電噴射質譜法對合成的多肽進行鑒定，完成多肽的制備；

(4)采用美國臨床實驗室標準化研究所推薦的測定最小抑菌濃度的方法，發現豬源衍生雜合肽MDP-2的最小抑菌濃度平均達到4μM，相比于其它豬源衍生雜合肽的抑菌活性強，通過最小溶血濃度測定多肽的細胞毒性，發現4條多肽在256μM濃度均沒有細胞毒性，豬源衍生雜合肽MDP-2的治療指數最高達到了128，綜合抑菌活性和溶血活性，從而選取豬源衍生雜合肽MDP-2。

本發明的另外一個目的在于提供如上所述的豬源衍生雜合抗菌肽MDP-2在制備治療革蘭氏陽性菌或/和革蘭氏陰性菌感染性疾病藥物中的應用。