[發(fā)明專利]miRNA-30a及其靶基因在肺癌檢測(cè)中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910609477.2
• 申請(qǐng)日: 2019-07-08
• 公開（公告）號(hào): CN110257521B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁凌波;羅鳳鳴;袁波;朱文君;陳雪梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;G01N33/574
• 代理公司: 北京預(yù)立生科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11736
• 代理人: 李紅偉;孟祥斌

本發(fā)明涉及miRNA?30a及其靶基因在檢測(cè)肺癌中的應(yīng)用。肺癌是當(dāng)前世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤，雖然臨床上也應(yīng)用一些腫瘤標(biāo)志物診斷肺癌，但檢測(cè)的敏感性和特異性均有限，尋找新型肺癌診斷相關(guān)的腫瘤標(biāo)記物或新的標(biāo)志物組合物對(duì)于肺癌的早期診斷顯得至關(guān)重要。發(fā)明人運(yùn)用高通量測(cè)序及數(shù)據(jù)分析，篩選到很好的肺癌標(biāo)志物，為臨床提供了新的肺癌基因診斷靶點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子診斷領(lǐng)域，具體涉及miR-30a及其靶基因在檢測(cè)肺癌中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

miRNA是一類內(nèi)源性、高度保守的、長(zhǎng)度大約為22個(gè)核苷酸的非編碼小分子RNA。miRNA通過其5'端可以與靶基因的3'端非翻譯區(qū)(3'UTR)特異性結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮調(diào)控作用。當(dāng)miRNA與靶基因3'UTR以堿基完全互補(bǔ)配對(duì)的方式結(jié)合會(huì)引起靶mRNA的降解，而通過非完全互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合的方式則會(huì)抑制mRNA的蛋白翻譯。

肺癌是當(dāng)前世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤，也是癌癥死亡的首要原因，極大威脅著人類的健康和生命。過去30年間，我國(guó)的肺癌的死亡率逐年上升，肺癌每年致死患者約40萬(wàn)例，成為我國(guó)增長(zhǎng)幅度最大、危害最為嚴(yán)重的惡性腫瘤。盡管近年在肺癌診斷方法、手術(shù)技術(shù)以及化療藥物方面均有新的發(fā)展，但肺癌患者總的5年生存率仍非常低，僅為15％左右。肺癌總體5年生存率之所以這么低，主要因?yàn)槎鄶?shù)肺癌患者就診時(shí)己處于晚期，或較早就出現(xiàn)播散轉(zhuǎn)移失去了手術(shù)根治機(jī)會(huì)。目前常用的肺癌診斷方法包括胸部X線、低劑量螺旋CT、痰液細(xì)胞學(xué)檢查、支氣管鏡下刷片或取活檢、支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢查等，但各種檢查手段在敏感性、特異性、適用度等方面均存在局限。雖然臨床上也應(yīng)用血清腫瘤標(biāo)志物診斷肺癌。常見的標(biāo)志物包括癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)、糖類抗原125、153、199(CA125、CA153、CA199)、組織多肽抗原(TPA)等。但這些腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的敏感性和特異性均有限，尋找新型肺癌診斷相關(guān)的腫瘤標(biāo)記物或新的治療策略對(duì)于肺癌的控制顯得至關(guān)重要。

本發(fā)明基于高通量測(cè)序方法，對(duì)3例肺腺癌患者的癌組織及癌旁組織進(jìn)行二代測(cè)序，獲得其miRNA和mRNA的表達(dá)數(shù)據(jù)，同時(shí)，結(jié)合生物信息學(xué)分析和文獻(xiàn)調(diào)研，從候選的miRNA中挑選出miR-30a及其靶基因EFNA3、CTHRC1、RTKN2、JAM2，進(jìn)行后續(xù)分析，結(jié)果顯示miR-30a的靶基因組合可以很好的診斷肺癌，本發(fā)明為臨床提供新的肺癌基因診斷標(biāo)志物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種肺癌診斷試劑，所述肺癌診斷試劑能夠檢測(cè)樣本中miR-30a的轉(zhuǎn)錄情況，或者檢測(cè)樣本中miR-30a的靶基因的轉(zhuǎn)錄或表達(dá)情況，靶基因選自下列基因中的一種或幾種：EFNA3、CTHRC1、RTKN2或JAM2。

所述miR-30a序列為SEQ ID NO 1：5’-uguaaacauccucgacuggaag-3’。

進(jìn)一步，肺癌為非小細(xì)胞肺癌，非小細(xì)胞肺癌包括肺鱗癌、肺腺癌、肺腺鱗癌、大細(xì)胞癌等；優(yōu)選的，肺癌為肺腺癌。

所述的樣本為腫瘤組織或外周血。

優(yōu)選的，靶基因?yàn)镋FNA3、CTHRC1、RTKN2或JAM2基因的兩兩組合；更優(yōu)選的，靶基因?yàn)榛騌TKN2和EFNA3的組合、RTKN2和JAM2的組合、EFNA3和JAM2的組合或者EFNA3和CTHRC1的組合。

優(yōu)選的，靶基因?yàn)镋FNA3、CTHRC1、RTKN2或JAM2基因的三三組合；更優(yōu)選的，靶基因?yàn)榛騌TKN2、EFNA3和CTHRC1的組合。

進(jìn)一步，肺癌診斷試劑是采用高通量測(cè)序方法和/或定量PCR方法和/或探針雜交方法檢測(cè)樣本中miR-30a或其靶基因的轉(zhuǎn)錄。

優(yōu)選采用二代測(cè)序法、譜芯片法、northern雜交方法、核酶保護(hù)分析技術(shù)、RAKE法、原位雜交、熒光定量PCR法檢測(cè)樣本中miR-30a或其靶基因的轉(zhuǎn)錄。