[發(fā)明專利]一種堿性蛋白酶的工業(yè)化液體發(fā)酵方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910601873.0
• 申請(qǐng)日: 2019-07-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110241101A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳永忠;陳圣卿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇邦臣生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/54
• 分類號(hào): C12N9/54;C12R1/07
• 代理公司: 北京七夏專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11632
• 代理人: 王曉豐

1.一種堿性蛋白酶的工業(yè)化液體發(fā)酵方法，其特征在于：包括如下步驟：①號(hào)種子培養(yǎng)：將產(chǎn)堿性蛋白酶的菌種接入1500毫升搖瓶中，培養(yǎng)基裝量100毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床220轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度36-38℃，培養(yǎng)時(shí)間6-15h；

②號(hào)種子培養(yǎng)：將①號(hào)種子按照10％的接種量接入500毫升搖瓶中，培養(yǎng)基裝量100毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床220轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度36-38℃，培養(yǎng)時(shí)間6-15h；培養(yǎng)條件與一級(jí)種子相同；

然后進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性蛋白酶的工業(yè)化液體發(fā)酵方法，其特征在于：所述發(fā)酵所用培養(yǎng)基為：發(fā)酵培養(yǎng)基g/L：酵母浸粉15-20、棉籽餅粉25-35、麥芽糊精90-110、檸檬酸鈉1-5、氯化鈣2-5、K2HPO415-20、pH自然、溶劑為水；

發(fā)酵條件為：溫度：30-40℃；轉(zhuǎn)速：100～600r/min；通風(fēng)量：1∶0.5～1∶2.5；溶氧維持在20～30％，發(fā)酵過(guò)程中自動(dòng)流加氨水及20％(v/v)的鹽酸，使發(fā)酵液pH值維持在7.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的堿性蛋白酶的工業(yè)化液體發(fā)酵方法，其特征在于：所述發(fā)酵培養(yǎng)：將①號(hào)種子罐菌種以5-10％接種量接入發(fā)酵罐，培養(yǎng)溫度32-36℃，攪拌速度200-700r/m，通風(fēng)量V/V1:1-3,罐壓0.05MPa,培養(yǎng)時(shí)間70-100h；

溶解氧控制：通過(guò)調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速及通風(fēng)量，控制溶解氧15-30％；

pH值控制：通過(guò)補(bǔ)氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過(guò)程中pH值值保持在7.0-7.5；

補(bǔ)料控制：當(dāng)發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時(shí)，開(kāi)始添加補(bǔ)料培養(yǎng)基，補(bǔ)料量使發(fā)酵液還原糖含量維持為2mg/ml-5mg/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的堿性蛋白酶的工業(yè)化液體發(fā)酵方法，其特征在于：所述補(bǔ)料培養(yǎng)基組成為：麥芽糊精45％，豆餅水解液4.0％，不足部分純凈水補(bǔ)足，pH78.0，123℃滅菌40min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性蛋白酶的工業(yè)化液體發(fā)酵方法，其特征在于：所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的調(diào)配方法為：按比例準(zhǔn)確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)pH值為6.0，加入中溫淀粉酶3u/g玉米粉與高溫淀粉酶30u/g玉米粉，同時(shí)邊攪拌邊升溫至70℃保溫15-30min，然后緩慢升溫至90℃保溫15-30min進(jìn)行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始pH值為7.0-8.0，121-123℃滅菌30-40min備用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的堿性蛋白酶的工業(yè)化液體發(fā)酵方法，其特征在于：所述豆餅水解液的制備方法為：將豆餅與水按照質(zhì)量比1:5-7均勻混合，然后加入豆餅質(zhì)量5-7％的石灰，攪拌均勻，于120℃反應(yīng)60-70min，降至室溫，即得豆餅水解液。