[發(fā)明專利]一種雙特異性核酸適體、衍生物、制備方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910596386.X
• 申請日: 2019-07-03
• 公開（公告）號: CN110283826A
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李娟;王麗萍;李婧影;楊黃浩
• 申請（專利權(quán)）人: 福州大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C07H21/02;C07H1/00;A61K31/7125;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

本發(fā)明提供了一種雙特異性核酸適體、衍生物、制備方法及其應(yīng)用，該核酸適體包括第一核酸序列、第二核酸序列；第一核酸序列包括靶標受體特異性核酸適體和第一連接部分，第二核酸序列包括配對受體特異性核酸適體和第二連接部分；靶標受體特異性核酸適體可與靶標受體特異性結(jié)合，配對受體特異性核酸適體可與配對受體特異性識別；第一連接部分與第二連接部分形成連接結(jié)構(gòu)。從而使兩個核酸適體能夠形成穩(wěn)定的雙特異性核酸適體結(jié)構(gòu)。該雙特異性核酸適體及其衍生物能夠阻礙配體對靶標受體的結(jié)合與激活，從而進一步影響細胞功能。本發(fā)明的技術(shù)方案提高了核酸適體對受體及細胞功能的調(diào)控效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及核酸適體領(lǐng)域、核酸適體藥物、蛋白功能調(diào)控領(lǐng)域，具體為一種雙特異性核酸適體、衍生物、制備方法及其應(yīng)用，尤其涉及核酸適體作為藥物在腫瘤治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

細胞膜表面的受體蛋白參與調(diào)控細胞的大多數(shù)生理和病理過程，如細胞周期、細胞交流、細胞分化、免疫應(yīng)答、細胞凋亡、細胞增殖以及細胞遷移等。值得注意的是，在生物學的研究中，由于細胞膜表面的受體蛋白參與了許多疾病的發(fā)生和發(fā)展，例如補體受體常與炎癥有關(guān)，蛋白酪氨酸激酶（PTKs）受體常與癌癥有關(guān)，因此這些膜受體蛋白也常被用作藥物作用的靶點，通過激活或者抑制這些靶點有助于相關(guān)疾病的治療。

目前，已發(fā)展了許多用于調(diào)控細胞表面受體蛋白活性的技術(shù)，如利用超聲、磁、光等都可以調(diào)控細胞的信號通路。但這些物理的調(diào)控方式往往是作用于整個細胞，缺乏分子特異性和時空分辨率，對細胞的損傷較大。為了克服這些缺陷，許多研究報道了利用小分子或者單克隆抗體代替物理刺激調(diào)控蛋白功能。但許多合成的小分子發(fā)揮作用的靶點都不止一個，會同時影響多個信號通路，產(chǎn)生副作用；而單克隆抗體成本高、免疫原性高、熱穩(wěn)定性差等缺點，也大大限制了其在生物醫(yī)學等研究領(lǐng)域的應(yīng)用。

因核酸適體與靶標作用的形式與抗體類似，也被稱為“化學抗體”。有研究報道，核酸適體通過折疊成特殊的三維結(jié)構(gòu)與靶標蛋白進行高親和性結(jié)合，從而調(diào)控靶標蛋白的活性。但是這種單一的單受體蛋白調(diào)控方式效率較低，且一些疾病細胞上過表達的蛋白在正常細胞上也會有表達，易造成非靶標細胞的毒副作用。因此迫切需要發(fā)展一種新的策略，能夠高效并特異性地調(diào)控受體蛋白的活性。

細胞表面會同時表達多種膜受體蛋白，因此同時靶向細胞表面多個受體蛋白能夠提高對細胞功能調(diào)控的特異性，從而提高疾病診斷和治療的準確性。本發(fā)明首次提出了利用雙特異性核酸適體探針人工誘導蛋白配對，從而高效并特異性地調(diào)控受體蛋白的功能，最終調(diào)控細胞的遷移行為。此外，由于選用的配對受體是腫瘤細胞高表達的膜蛋白，因此所構(gòu)建的雙特異性核酸適體對于該蛋白表達量低或者不表達的細胞不會造成功能影響。總而言之，該雙特異性核酸適體在細胞表面受體蛋白和細胞行為的調(diào)控效率和特異性方面有較大的提高，降低了非靶細胞毒性，對精準診療的推進具有重要意義，且具有作為蛋白功能和細胞行為抑制劑的潛能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思在于：提供一種雙特異性核酸適體，雙特異性核酸適體由兩個傳統(tǒng)意義上的“核酸適體”復合而成，通過兩個“核酸適體”形成連接結(jié)構(gòu)，從而使兩個“核酸適體”能夠形成穩(wěn)定的雙特異性核酸適體結(jié)構(gòu)。

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題包括但不限于以下任一個或多個：如何實現(xiàn)核酸適體的雙特異性；如何實現(xiàn)核酸適體對靶標受體的功能調(diào)控或達到干擾受體相關(guān)信號通路的效果；如何實現(xiàn)核酸適體對受體及細胞功能的調(diào)控作用；如何實現(xiàn)腫瘤細胞的治療等。

為解決以上任一個或多個技術(shù)問題，本發(fā)明提供的具體技術(shù)方案如下。

本發(fā)明的第一方面提供了一種雙特異性核酸適體，所述核酸適體包括第一核酸序列、第二核酸序列；所述第一核酸序列包括靶標受體特異性核酸適體和第一連接部分，所述第二核酸序列包括配對受體特異性核酸適體和第二連接部分；所述靶標受體特異性核酸適體可與靶標受體特異性結(jié)合，所述配對受體特異性核酸適體可與配對受體特異性識別；所述第一連接部分與所述第二連接部分形成連接結(jié)構(gòu)。