[發(fā)明專利]一種評估公豬精子質(zhì)量的方法

在審

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• 申請日: 2019-07-03
• 公開（公告）號(hào): CN110426339A
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李飛龍;趙云翔;羅苑華
• 申請（專利權(quán)）人: 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N15/14
• 分類號(hào): G01N15/14;G01N1/34;G01N1/38;G01N1/30
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 朱繼超

1.一種評估公豬精子質(zhì)量的方法，其特征在于，具體步驟為：首先采集精液，然后將精液洗滌去除精漿，再離心得到精子，然后將精子稀釋，最后分別對稀釋的精子的外在指標(biāo)和內(nèi)在指標(biāo)進(jìn)行檢測，所述內(nèi)在指標(biāo)的檢測方法為FCM流式細(xì)胞術(shù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求書1中所述的評估公豬精子質(zhì)量的方法，其特征在于，所述精液洗滌是利用磷酸緩沖液或BWW培養(yǎng)液洗滌，所述離心的溫度為4℃，離心轉(zhuǎn)速為850rpm/min，離心時(shí)間為5min，所述精子的稀釋濃度為0.2-0.5億/ml，所述精子的稀釋液為葡萄糖-檸檬酸鈉-卵黃液。

3.根據(jù)權(quán)利要求書1中所述的評估公豬精子質(zhì)量的方法，其特征在于，所述精子外在指標(biāo)的檢測是利用CASA系統(tǒng)進(jìn)行檢測。

4.根據(jù)權(quán)利要求書1中所述的評估公豬精子質(zhì)量的方法，其特征在于，所述精子外在指標(biāo)分別為密度檢測、活力檢測和畸形率檢測。

5.根據(jù)權(quán)利要求書1中所述的評估公豬精子質(zhì)量的方法，其特征在于，所述精子檢測內(nèi)在指標(biāo)分別為：

(1)精細(xì)胞質(zhì)膜的完整性檢測；

(2)精細(xì)胞中線粒體活性檢測；

(3)精細(xì)胞的氧化力檢測；

(4)精細(xì)胞頂體的完整性檢測；

(5)細(xì)菌的濃度檢測。

6.根據(jù)權(quán)利要求書5所述的評估公豬精子質(zhì)量的方法，其特征在于，所述精細(xì)胞質(zhì)膜完整性檢測的步驟為：使用EASYKIT 1 viability and concentration熒光染料對精子進(jìn)行標(biāo)記，然后通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。

7.根據(jù)權(quán)利要求書5中所述的評估公豬精子質(zhì)量的方法，其特征在于，所述精細(xì)胞中線粒體活性檢測的步驟為：首先使用EASYKIT 2 Mitochondrial activity熒光染料對精細(xì)胞中的中端線粒體部位進(jìn)行染色，然后通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。

8.根據(jù)權(quán)利要求書5中所述的評估公豬精子質(zhì)量的方法，其特征在于，所述精細(xì)胞氧化力檢測的步驟為：首先用0.8-5mmol/L H₂O₂處理精細(xì)胞，然后使用EASYKIT 3 Oxidationmolecule D熒光染料對處理后的精細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，最后通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。

9.根據(jù)權(quán)利要求書5中所述的評估公豬精子質(zhì)量的方法，其特征在于，所述精細(xì)胞頂體完整性檢測的步驟為：使用EASYKIT 5 viability和acrosome integrity兩種熒光染料對精細(xì)胞頂體膜進(jìn)行標(biāo)記，然后通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。

10.根據(jù)權(quán)利要求書5中所述的評估公豬精子質(zhì)量的方法，其特征在于，所述細(xì)菌濃度的檢測的步驟為：首先過濾細(xì)菌，然后使用EASYKIT 6 Bacterial concentration熒光染料進(jìn)行標(biāo)記，最后通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。