[發明專利]一組脊柱結核血漿miRNA聯合診斷標記物及其應用

有效

• 申請號: 201910588047.7
• 申請日: 2019-07-02
• 公開（公告）號: CN110205378B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 王自立;梁強;費駿;黃志剛;柳盛春
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學總醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理有限公司 11363
• 代理人: 逯長明;許偉群

本申請公開一組脊柱結核血漿miRNA聯合診斷標記物，所述聯合診斷標記物包括以下組分中的至少一種：hsa?miR?543、hsa?miR?506?3p和hsa?miR?195?5p，其中，hsa?miR?543的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，hsa?miR?506?3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，hsa?miR?195?5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述聯合診斷標記物聯合能夠用作篩查脊柱結核的標志物，聯合血漿中所述聯合診斷標記物能夠準確標記感染脊柱結核的血漿。

技術領域

本申請屬于分子生物學領域，特別涉及一種用于脊柱結核聯合標記物及其應用。

背景技術

近年來隨著流動人口的增多、耐藥結核桿菌的出現以及獲得性自身免疫缺陷病的流行，結核病的發病率逐年上升，2014年全球新發結核病960萬例，中國新發結核病93萬例，位居全球第三位。研究表明90％以上的骨關節結核來源于肺結核，脊柱結核約占所有結核病的5％。

目前，脊柱結核的診斷主要依靠臨床表現和影像學改變，再輔以各種肺結核病的實驗室檢查。然而，這些診療策略存在著諸多不足，例如，近年的許多研究指出，僅憑臨床表現、影像學檢查資料的診斷作用很有限，難于將結核與化膿性感染、真菌性感染或者骨腫瘤相鑒別；并且，由于約占脊柱結核11.5％的“非典型性脊柱結核”以及約占骨關節結核14.29％的非結核分枝桿菌病的存在，使脊柱結核的診斷更為困難。目前仍缺乏對脊柱結核特異性的實驗室診斷方法。結核病診斷的“金標準”為細菌培養，但其培養陽性率僅為48％，且需要耗時6～8周，同時存在術前培養標本難獲取的問題。組織病理學對脊柱結核的診斷率約為68％，干酪樣物質與郎罕氏細胞亦可出現在非結核分枝桿菌病，從而導致誤診。診斷肺結核常用的實驗室檢測方法，例如，結核菌素實驗、抗結核抗體檢測、結核桿菌PCR檢測以及γ-干擾素釋放實驗等均存在著假陽性、假陰性的結果。綜上所述，目前尚缺乏能夠準確、特異性診斷脊柱結核的技術手段。開發一種脊柱結核特異性生物標記物具有重要的科學意義與社會意義。

血漿miRNA具備高度的生物穩定性、組織特異性、時空特異性、易于檢測等特點，具備作為疾病診斷標記物的先天條件。近年來隨著對微小RNA(microRNA，miRNA)研究的不斷深入，研究者通過核酸組學(Omics)研究證實miRNA可作為用于診斷肺結核及其它許多疾病的生物標記物，并且，一部分miRNA正在被開發為商品。因此，期待以miRNA為突破口，尋找可用于脊柱結核診斷的特異性生物診斷標記物。

發明內容

本申請對入選的脊柱結核患者分別進行血漿miRNA的基因芯片檢測、RT-qPCR大樣本臨床驗證，從而最終獲得一組脊柱結核特異性血漿miRNA聯合診斷標記物以及包括所述聯合診斷標記物的試劑盒，所述聯合診斷標記物包括以下組分：hsa-miR-543、hsa-miR-506-3p和hsa-miR-195-5p，其中，hsa-miR-543的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，hsa-miR-506-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，hsa-miR-195-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

本申請的目的在于提供以下幾個方面：

第一方面，本申請提供一組脊柱結核血漿miRNA聯合診斷標記物，所述聯合診斷標記物包括以下組分中的至少一種：hsa-miR-543、miRNA-506-3p和hsa-miR-195-5p，其中，hsa-miR-543的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，miRNA-506-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，hsa-miR-195-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

通過后續實驗，發明人發現hsa-miR-543的靶蛋白為RANKL，該基因能夠通過OPG/RANKL/RANK信號通路調節破骨細胞的活化與增值。并且，本發明研究發現，在血液樣本中，相對健康人群，hsa-miR-543在脊柱結核患者血液中顯著下降，其靈敏度可達68.7％，特異性可達83.1％。因此，所述hsa-miR-543可用于脊柱結核篩查。