[發明專利]一種通過RAPD檢測鑒別螺旋藻藻絲瀝水性能優劣的方法

有效

• 申請號: 201910582527.2
• 申請日: 2019-06-29
• 公開（公告）號: CN110241241B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 汪志平;汪凡越;盧奇奇
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6858;C12Q1/04;C12R1/89
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

1.一種通過RAPD檢測鑒別螺旋藻藻絲瀝水性能優劣的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）從培植池取鈍頂螺旋藻藻液，用毛細吸管顯微分離法挑取長度≥300 μm的藻絲單體，培養成藻絲群體；

（2）對步驟（1）中所得藻絲群體取樣，然后用序列為 5’-AGGGCCGTCT-3’ 的引物S90的進行隨機擴增及多態性DNA分析與檢測；如果最終無法用引物S90擴增出590 bp的條帶，表明被鑒別藻絲具有良好瀝水性能；反之，則表明被鑒別藻絲瀝水性能差。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中培養條件為：以40 W日光燈為光源，光照強度54 μmol photons·m^-2·d^-1，按光照12 h和黑暗12 h交替的方式控制光照條件，光照時溫度28℃、黑暗時溫度20℃。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，該方法具體包括：

（1.1）從規模化生產的培植池中取5 mL螺旋藻藻液，用毛細吸管顯微分離法挑取長度≥300 μm的藻絲單體5條，分別置于編號且盛有1.0 mL Zarrouk培養液的2.0 mLEppendorf管中培養25 d，培植成藻絲群體；

（1.2）從步驟（1.1）的每只Eppendorf管中各吸取0.1 mL藻液，分別轉入編號且盛有1.0mL Zarrouk培養液的2.0 mL Eppendorf管中繼續培養；每只Eppendorf管中剩余0.9 mL藻液分別用濾紙過濾收集藻體并編號，提取各管藻體的基因組DNA；

（1.3）分別利用RAPD技術對步驟（1.2）過濾收集到的藻體的基因組DNA進行多態性分析，如果最終無法用引物S90擴增出590 bp的條帶，表明被鑒別藻絲具有良好瀝水性能；反之，則表明被鑒別藻絲瀝水性能差；

（1.4）根據步驟（1.3）的鑒定結果，從步驟（1.2）繼續培養的藻絲中，挑選出瀝水性能好的藻絲的Eppendorf管，將其中的藻絲用于工廠化培植生產。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟（1.3）中的RAPD技術具體包括：

（2.1） 25 μL PCR反應體系中含10倍的PCR緩沖液2.5 μL、4種dNTP各1 μmol/L、引物0.5 μmol/L、2.5 U的TaqDNA聚合酶、100 ng基因組DNA；PCR反應程序為94℃ 5 min、94℃30s、36℃ 1 min、72℃1 min，35個循環，最后72℃延伸10 min；

（2.2）將步驟（2.1）中的擴增產物在1%的瓊脂糖凝膠上電泳，電壓4 V/cm；電泳完后用EB染色30 min，再在VersaDoc^TMImaging System 3000凝膠成像系統觀察并照相。