[發明專利]用于檢測SYT-SSX融合基因的引物、試劑盒和方法在審
| 申請號： | 201910566697.1 | 申請日： | 2019-06-27 |
| 公開（公告）號： | CN110218774A | 公開（公告）日： | 2019-09-10 |
| 發明（設計）人： | 王淑一;吳鵬飛;裘振亞 | 申請（專利權）人： | 杭州艾迪康醫學檢驗中心有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6858 | 分類號： | C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 浙江千克知識產權代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎雙華 |
| 地址： | 310030 浙江省杭州*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 融合基因 引物 檢測 試劑盒 探針 內參基因 判讀結果 特異性強 靈敏度 高通量 測序 | ||
1.用于檢測SYT-SSX融合基因的引物，其特征在于，所述引物包括：
(1)檢測SYT-SSX1或SYT-SSX2融合基因的引物及探針，其堿基序列為：
SYT-SSX-F：5’-CACCACAGCCACCCCAGC-3’
SYT-SSX-TaqMan：5’-FAM ACCAGATCATGCCCAAGAAGCCAGC-TAM RA-3’；
SSX1-R：5’-CACTCCCTTCGAATCATTTTCG-3’；
SSX2-R：5’-CACTTCCTCCGAATCATTTCCT-3’；
(2)檢測內參基因的引物及探針，其堿基序列為：
Actin-F：5’-TGAGCGAGGCTACAGCTT-3’；
Actin-R：5’-TCCTTGATGTCGCGCACGATTT-3’；
Actin-Probe：5’-FAM-ACCACCACGGCCGAGCCC-TAMRA-3’。
2.如權利要求1所述的引物，其特征在于，SYT-SSX-F、SSX1-R\SSX2-R和SYT-SSX-TaqMan的濃度比為1:1:1。
3.如權利要求1所述的的引物，其特征在于，Actin-F、Actin-R和Actin-Probe的使用濃度比為1:1:1。
4.用于檢測SYT-SSX融合基因的ARMS-QPCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括qPCR反應體系，qPCR反應體系包括qPCR混合反應液、反應引物和陽性對照樣品；
qPCR混合反應液包括PCR緩沖液、dNTP、MgCl2、KOD酶、PCR上下游引物和TaqMan探針、檢測內參基因的引物及探針和陽性對照樣品；qPCR反應體系中，各組分的終濃度分別為：PCR緩沖液為1X；dNTP為1.5mM；MgCl2為2mM；KOD酶為0.6U/μl；PCR上下游引物為0.1μM；TaqMan探針為0.1μM；陽性對照樣品為1ng/μl；其中
所述PCR上下游引物、TaqMan探針的序列為：
SYT-SSX-F：5’-CACCACAGCCACCCCAGC-3’
SYT-SSX-TaqMan：5’-FAM ACCAGATCATGCCCAAGAAGCCAGC-TAM RA-3’；
SSX1-R：5’-CACTCCCTTCGAATCATTTTCG-3’；
SSX2-R：5’-CACTTCCTCCGAATCATTTCCT-3’；
所述檢測內參基因的引物及探針能夠擴增所有不同cDNA摸板，其堿基序列為：
Actin-F：5’-TGAGCGAGGCTACAGCTT-3’；
Actin-R：5’-TCCTTGATGTCGCGCACGATTT-3’；
Actin-Probe：5’-FAM-ACCACCACGGCCGAGCCC-TAMRA-3’。
所述陽性對照樣品分別為SYT-SSX1或SYT-SSX2融合基因的cDNA質粒。
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