[發(fā)明專利]一種檢測隱色素基因CRY1啟動子甲基化的引物及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910547280.0
• 申請日: 2019-06-24
• 公開（公告）號: CN110195108A
• 公開（公告）日: 2019-09-03
• 發(fā)明（設計）人: 吳明彩;蔣明;章堯;呂俊;徐蕾;薛夢雅;程彬;李青
• 申請（專利權(quán)）人: 皖南醫(yī)學院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權(quán)代理事務所 11308
• 代理人: 范奇

本發(fā)明公開了一種檢測隱色素基因CRY1啟動子甲基化的引物及方法，涉及生物工程技術(shù)領域，該引物包括與發(fā)生甲基化的模板匹配的甲基化上游引物MF和甲基化下游引物MR，與未發(fā)生甲基化的模板匹配的非甲基化上游引物UF和非甲基化下游引物UR，該引物具有靈敏度高、特異性好等優(yōu)點，實現(xiàn)了CRY1基因啟動子甲基化的準確檢測；同時，檢測結(jié)果對于急性髓系白血病預后相關(guān)性研究具有重要意義與價值。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領域，特別是指一種檢測隱色素基因CRY1啟動子甲基化的引物及方法。

背景技術(shù)

腫瘤是嚴重危害人類健康的疾病，死亡率較高且近年來增長速度較快，世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計顯示每年新診斷出的腫瘤病例已超過1400萬人，且多數(shù)腫瘤患者的預后情況并不理想。目前導致腫瘤預后較差的原因是腫瘤發(fā)生的生物學機制復雜，存在個體差異性，因此，探尋高靈敏度的特異性生物學指標，早期評估腫瘤的預后情況，從而改善預后，對提高腫瘤患者生存率至關(guān)重要。

急性髓系白血病(AML)是累計造血干細胞的一種異質(zhì)性克隆血液學惡性腫瘤，是成人急性白血病中最常見的類型。其特征為以髓樣祖細胞增殖不受控制以及抑制成熟血細胞分化的能力而導致造血功能不全。多數(shù)AML患者存在難治、復發(fā)及預后較差等情況，老年患者平均生存期不足1年，年輕患者中約50％平均生存期可達到5年。因此，進一步探索AML疾病機制，探尋新的治療方法及促進預后是凾待解決的問題。AML發(fā)病機制復雜，近年來，分子生物學的研究證實AML的發(fā)展與白血病細胞的基因異常和表觀遺傳學改變有關(guān)，二者是決定治療效果和預后的重要因素。表觀遺傳學指非DNA序列改變導致基因表達水平的異常。DNA甲基化是最常見和研究最多的表觀遺傳改變現(xiàn)象之一，DNA甲基化通過調(diào)控基因表達從而導致疾病的發(fā)生。近年來多項研究表明遺傳生物標志物為評估預后和預測AML患者的治療效果提供了有用的信息。因此，尋找新的基因表觀遺傳學改變可能有助于鑒別AML預后情況以及優(yōu)化治療策略。

CRY1屬于隱色素/光修復酶蛋白家族，是光修復酶的同源物。隱色素基因編碼一種黃素蛋白，包括CRY1與CRY2，是調(diào)控晝夜節(jié)律的振蕩器中的核心組件。隱色素與生物鐘蛋白(period，PER1-3)共同對驅(qū)動振蕩器的生物鐘基因反饋環(huán)起負調(diào)控作用。隱色素在調(diào)控晝夜節(jié)律中起重要作用，晝夜節(jié)律的紊亂與很多疾病包括腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，隱色素基因可控制細胞代謝、增殖、分化、凋亡以及DNA損傷應激等。CRY1的高表達與乳腺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、白血病等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，與多種腫瘤的預后不良也密切相關(guān)。CRY1高表達的患者較低表達的患者無進展生存期(PFS)顯著縮短，CLL低危患者CRY1基因啟動子區(qū)高甲基化而誘導轉(zhuǎn)錄沉默，同時CLL高危患者和正常人CRY1基因啟動子呈現(xiàn)低甲基化狀態(tài)。但目前尚無CRY1與急性髓系白血病的預后相關(guān)性研究。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提出一種檢測隱色素基因CRY1啟動子甲基化的引物及方法，用于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的全部或者部分不足。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種檢測隱色素基因CRY1啟動子甲基化的引物，其特征在于，該引物包括與發(fā)生甲基化的模板匹配的甲基化上游引物MF和甲基化下游引物MR，與未發(fā)生甲基化的模板匹配的非甲基化上游引物UF和非甲基化下游引物UR，所述甲基化上游引物MF：5′-TATTATTGGTTTTTGAAGGAAATCG-3′，甲基化下游引物MR:5′-CTACGTTCCAAAAAATAAAAAAACG-3′；其中，下劃線標注的是和發(fā)生了甲基化的DNA相匹配的位點。