[發(fā)明專(zhuān)利]ND4基因重組腺相關(guān)病毒載體及其制備方法和應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910542807.0 | 申請(qǐng)日： | 2019-06-21 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN112111515A | 公開(kāi)（公告）日： | 2020-12-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李斌 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 武漢紐福斯生物科技有限公司 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N15/861 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N15/861;C12N5/10;C07K19/00;A61K48/00;A61K38/44;A61P27/02 |
| 代理公司： | 上海弼興律師事務(wù)所 31283 | 代理人： | 王衛(wèi)彬;黃益澍 |
| 地址： | 430040 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)高新大道666號(hào)*** | 國(guó)省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | nd4 基因 重組 相關(guān) 病毒 載體 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種包含ND4基因表達(dá)盒的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述重組腺相關(guān)病毒載體的骨架為pAAV9，所述ND4基因表達(dá)盒包含人ND4基因或優(yōu)化的人ND4基因。
2.如權(quán)利要求1所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述ND4基因表達(dá)盒從N端至C端依次包含啟動(dòng)子、線粒體靶向序列、人ND4基因或優(yōu)化的人ND4基因、和/或UTR序列。
3.如權(quán)利要求2所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述啟動(dòng)子為CMV啟動(dòng)子或CAG啟動(dòng)子；所述啟動(dòng)子的核苷酸序列優(yōu)選如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7所示。
4.如權(quán)利要求2所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述線粒體靶向序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10所示；和/或，所述UTR序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
5.如權(quán)利要求2所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述人ND4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，所述優(yōu)化的人ND4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11所示。
6.如權(quán)利要求2所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述ND4基因表達(dá)盒的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示；或者所述ND4基因表達(dá)盒的核苷酸序列從N端至C端依次為SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:3、SEQID NO:9、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或依次為SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6。
7.一種轉(zhuǎn)化體，其特征在于，將如權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的重組腺相關(guān)病毒載體導(dǎo)入宿主，并使之整合在所述宿主的基因組上；較佳地，所述宿主為哺乳動(dòng)物細(xì)胞；更佳地，所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞為HEK293細(xì)胞。
8.一種制備如權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的重組腺相關(guān)病毒載體的方法，其特征在于，所述方法包含以下步驟：將所述ND4基因表達(dá)盒插入到腺相關(guān)病毒載體pAAV9中即得。
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