[發明專利]一種利用黑腹果蠅評價鄰苯二甲酸酯類增塑劑的生殖毒性的方法

在審

• 申請號: 201910532469.2
• 申請日: 2019-06-19
• 公開（公告）號: CN110226567A
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發明（設計）人: 洪喻;張晴;郝立翀;路雯多
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033;A23K50/90;A23K10/30;A23K10/18;A23K20/163;A23K20/24;A23K20/10;A23K20/111
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

1.一種利用黑腹果蠅評價鄰苯二甲酸酯類增塑劑的生殖毒性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將黑腹果蠅置于含有鄰苯二甲酸酯類增塑劑的固體培養基上培養，培養7d～10d，培養結束后將黑腹果蠅的親代除去，隨后每天統計黑腹果蠅的子一代蛹的數量和子一代成蠅的數量，得到第11d～第30d子一代蛹的總數量和子一代成蠅的總數量；

2)將黑腹果蠅置于固體培養基上培養，培養7d～10d，培養結束后將黑腹果蠅的親代除去，隨后每天統計黑腹果蠅的子一代蛹的數量和子一代成蠅的數量，得到第11d～第30d子一代蛹的總數量和子一代成蠅的總數量；

3)當所述步驟1)的第11d～第30d子一代蛹的總數量、子一代成蠅的總數量與步驟2)的第11d～第30d子一代蛹的總數量、子一代成蠅的總數量相比，任一項出現顯著差異時，表明鄰苯二甲酸酯類增塑劑具有生殖毒性；

所述含有鄰苯二甲酸酯類增塑劑的固體培養基中鄰苯二甲酸酯類增塑劑的體積濃度為0.1～1％。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)和2)黑腹果蠅的數量獨立的為18～22對；

所述鄰苯二甲酸酯類增塑劑包括鄰苯二甲酸二異壬酯。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)含有鄰苯二甲酸酯類增塑劑的固體培養基以水為溶劑，每升還包括：70～80g玉米面、30～35g酵母、8～12g瓊脂、0.5～1gCaCl₂、30～33g蔗糖、60～65g葡萄糖、1～3g山梨酸鉀和15ml5％對羥基苯甲酸丁酯溶液。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養的條件包括：所述培養的溫度為24～26℃，所述培養的光暗比為12h:12h；所述培養的環境濕度為50～60％。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)固體培養基以水為溶劑，每升包括：70～80g玉米面、30～35g酵母、8～12g瓊脂、0.5～1g CaCl₂、30～33g蔗糖、60～65g葡萄糖、1～3g山梨酸鉀和15ml5％對羥基苯甲酸丁酯溶液。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括：統計步驟1)第11d～30d黑腹果蠅的總羽化率，統計步驟2)第11d～30d黑腹果蠅的總羽化率，當步驟1)得到的總羽化率與步驟2)得到的總羽化率相比，出現顯著差異時，表明鄰苯二甲酸酯類增塑劑具有生殖毒性。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括：統計步驟1)第11d～30d每天羽化黑腹果蠅的平均體重，統計步驟2)第11d～30d每天羽化黑腹果蠅的平均體重，當步驟1)得到的平均體重與步驟2)得到的平均體重相比，出現顯著差異時，表明鄰苯二甲酸酯類增塑劑具有生殖毒性。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括：統計步驟1)第11d～15d內黑腹果蠅的子一代幼蟲的平均運動速度，統計步驟2)第11d～15d內黑腹果蠅的子一代幼蟲的平均運動速度，當步驟1)得到的平均速度與步驟2)得到的平均運動速度相比，出現顯著差異時，表明鄰苯二甲酸酯類增塑劑具有生殖毒性。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括：統計步驟1)第11d～15d內黑腹果蠅的子一代幼蟲的平均運動距離，統計步驟2)第11d～15d內黑腹果蠅的子一代幼蟲的平均運動距離，當步驟1)得到的平均運動距離與步驟2)得到的平均運動距離相比，出現顯著差異時，表明鄰苯二甲酸酯類增塑劑具有生殖毒性。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括：統計步驟1)第11d～15d內黑腹果蠅的子一代幼蟲的平均運動次數，統計步驟2)第11d～15d內黑腹果蠅的子一代幼蟲的平均運動次數，當步驟1)得到的平均運動距離與步驟2)得到的平均運動次數相比，出現顯著差異時，表明鄰苯二甲酸酯類增塑劑具有生殖毒性。