[發明專利]一種檢測BCORL1基因內含子7基因突變的引物和方法

在審

• 申請號: 201910529910.1
• 申請日: 2019-06-19
• 公開（公告）號: CN110218773A
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發明（設計）人: 劉趙玲;裘振亞;王淑一
• 申請（專利權）人: 濟南艾迪康醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍

本發明公開了一種檢測BCORL1基因內含子7區域51318 A＞AG位點突變的引物和方法，其包括(i)擴增BCORL1基因內含子7序列的引物；采用Sanger測序技術和測序引物。采用Sanger測序技術，可快速發現此突變位點。利用本發明完成的檢測結果準確，可以輔助檢查該區域的突變情況。本發明可快速地將BCORL1基因內含子7區域51318 A＞AG突變檢測出來。利用本發明完成的檢測結果準確，可以輔助診斷AML和再生障礙性貧血，對疾病的診斷和預后有重要的參考意義。

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別涉及檢測BCORL1基因內含子7 基因突變的引物和檢測方法。

背景技術

BCORL1基因位于X染色體Xq25-q26.1細胞帶，大約在129.14至129.19Mb 之間，含有13個外顯子，編碼1711個氨基酸，是一個轉錄共抑制因子。在大部 分人正常組織中BCORL1呈現低表達或表達缺失，僅僅在睪丸和前列腺組織呈 現高表達。

BCORL1基因的功能研究發現，其與Ⅱ類組蛋白脫乙酰基酶(histonedeacetylase，H D A C)存在相互作用，如HDAC4、HDAC5和HDAC7，BCOR1 通過結合啟動子區域特定位點抑制E—cadherin基因轉錄，另外，BCORL1也 可以與c端結合蛋白(C—terminalbinding protein，CtBP)協同作用，發揮E —cadherin轉錄抑制功能。E—cadherin表達受損NSCIC、胃癌、肝細胞癌和卵 巢癌等腫瘤侵襲轉移相關，而在包括NSCLC在內的多種腫瘤中，E—cadherin 啟動子甲基化狀態與其基因表達調控相關。提示BCORL1是一個腫瘤相關促進 基因。

80％BCORL1基因突變發生在原始細胞，細胞系中的所有BCORL1突變都 會截斷編碼蛋白，從而引起無義突變、剪接位點突變或插入或缺失。所有BCORL1 截斷突變都被預測會導致缺乏LXXLL核受體募集模體和C端的多肽嚴重縮短。 BCORL1突變在AML發病機制中起重要作用，在6％的急性髓性白血病(AML) 患者以及21％的AML細胞系中的存在BCORL1基因突變，BCORL1是一個 新的候選腫瘤促進基因。

除此之外，BCORL1基因突變還和再生障礙性貧血(AA)有關，研究結果 顯示，AA突變最常累及的5個基因為PIGA、BCOR/BCORL1、DNMT3A和 ASXL1。BCOR、BCORL1和PIGA基因突變在AA患者中更為顯著，而JAK2、 RUNX1、TET2和TP53基因突變在AA中則相對少見。并且，AA患者基因突 變在位點分布上與MDS/AML有高度重疊，主要表現為移碼、無義和剪接突變。因此，對再生障礙性貧血的患者檢測BCORL1基因突變，有助于了解疾病進程， 而且AA高度特異性突變(如BCOR、BCORL1和PIGA突變)通常提示對免疫 抑制療法有好的效果并預后良好，生存率高。

由此表明，BCORL1基因突變的檢測對再生障礙性貧血疾病進程演變及預后 觀測有重要的作用，尤其是在成人急性髓系白血病中的預后判斷及治療藥物的選 擇具有重要的指導意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測BCORL1基因內含子7突變熱點的引物，采 用PCR技術，可用于快速檢測患者體內BCORL1基因內含子7突變位點的情況。 所述檢測BCORL1基因內含子7位點突變情況的引物，包括：

擴增BCORL1基因內含子7的引物，其堿基序列為：

BCORL1-Int7-F：TTTCCTGTTTCTTGCCTTCA

BCORL1-Int7-R：TTCCCATTCTGCAAATCCAC。

進一步地，還包括測序引物，其堿基序列為：

檢測BCORL1基因內含子7的測序引物堿基序列為：