[發(fā)明專利]同時(shí)檢測HBA1/2和HBB基因突變的試劑盒和方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910514793.1
• 申請(qǐng)日: 2019-06-13
• 公開（公告）號(hào): CN112080558A
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛愛平;韓晉;張曉杰;張建光
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京貝瑞和康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 北京市金杜律師事務(wù)所 11256
• 代理人: 孟凡宏;謝燕軍

1.一種用于同時(shí)擴(kuò)增HBA1/2和HBB基因片段的引物組，所述引物組包括如下引物對(duì)：

(1)SEA引物對(duì)；

(2)4.2引物對(duì)；

(3)WT引物對(duì)；

(4)3.7引物對(duì)；和

(5)HBB引物對(duì)；

其中所述SEA引物對(duì)分別位于基因組hg19 chr16:215396-234699上下游；所述4.2引物對(duì)分別位于基因組hg19 chr16:219568-224747上下游；所述WT引物對(duì)分別位于基因組hg19chr16:222951-223597上下游；所述3.7引物對(duì)分別位于基因組hg19 chr16:222188-227321上下游；和所述HBB引物對(duì)分別位于基因組hg19 chr11:5246715-5248391上下游。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物組，其中所述引物組的序列如SEQ ID NO.1-10所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物組，其中所述引物組用于多重PCR擴(kuò)增HBA1/2和HBB基因片段。

4.一種同時(shí)檢測HBA1/2和HBB基因突變的試劑盒，包括以下試劑：

(1)用于多重PCR擴(kuò)增HBA1/2和HBB基因片段的試劑；和

(2)用于構(gòu)建PacBio文庫的試劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其中所述用于多重PCR擴(kuò)增的試劑包括DNA聚合酶、反應(yīng)緩沖液和引物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其中所述引物包括用于擴(kuò)增HBA1/2和HBB基因的引物組，所述引物組包括如下引物對(duì)：

(1)SEA引物對(duì)；

(2)4.2引物對(duì)；

(3)WT引物對(duì)；

(4)3.7引物對(duì)；和

(5)HBB引物對(duì)其中所述SEA引物對(duì)分別位于基因組hg19 chr16:215396-234699上下游；所述4.2引物對(duì)分別位于基因組hg19 chr16:219568-224747上下游；所述WT引物對(duì)分別位于基因組hg19 chr16:222951-223597上下游；所述3.7引物對(duì)分別位于基因組hg19chr16:222188-227321上下游；和所述HBB引物對(duì)分別位于基因組hg19 chr11:5246715-5248391上下游。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其中所述引物序列如SEQ ID NO.1-10所示。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其中所述試劑盒用于同時(shí)檢測HBA1/2和HBB基因的缺失型和非缺失型突變。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其中所述試劑盒用于檢測常見HBA1/2和HBB基因的不同突變是否連鎖。

10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其中所述HBA1/2和HBB基因突變?yōu)槌Ｒ奌BA1/2和HBB基因突變，包括由HBA1/2基因缺失引起的--^SEA、-α^3.7與-α^4.2三種缺失型突變；位于HBA2基因的QS、CS、WS三種點(diǎn)突變；以及位于HBB基因的突變，包括以下17種常見的突變型：-32(C-A)、-30(T-C)、-29(A-G)、-28(A-G)、Cap+40-43(-AAAC)、Int(T-G)、CD14/15(+G)、CD17(A-T)、CD26(G-A)、CD27/28(+C)、CD31(-C)、CD41/42(-TCTT)、CD43(G-T)、CD71/72(+A)、IVS-I-1(G-T,G-A)、IVS-I-5(G-C)和IVS-II-654(C-T)。

11.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其中所述多重PCR擴(kuò)增在單反應(yīng)管中完成。