[發明專利]甬優4949種子純度檢測的SSR引物及方法

有效

• 申請號: 201910491102.0
• 申請日: 2019-06-06
• 公開（公告）號: CN110093448B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 周元坤;李詩成;胡世平
• 申請（專利權）人: 武漢佳禾生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 武漢明正專利代理事務所(普通合伙) 42241
• 代理人: 江灃

本發明公開了甬優4949種子純度檢測的SSR引物，所述SSR引物包括引物對RM72或引物對RM224；其中，引物對RM72包含：正向引物，其從5’端到3’為：CCGGCGATAAAACAATGAG，反向引物，其從5’端到3’為：GCATCGGTCCTAACTAAGGG；引物對RM224包含：正向引物，其從5’端到3’為：ATCGATCGATCTTCACGAGG，反向引物，其5’端到3’為：TGCTATAAAAGGCATTCGGG。本發明還提供了甬優4949種子純度檢測方法，通過特異性條帶可用來檢測甬優4949種子純度。

技術領域

本發明涉及種子檢測技術領域。更具體地說，本發明涉及一種用于甬優4949種子純度的SSR引物及方法。

背景技術

甬優4949種子是武漢佳禾生物科技有限責任公司與寧波市種子公司研發出的秈粳雜交新品種，近幾年推廣應用面積達到50萬畝，并且還在逐年上升階段。甬優4949不僅在普通栽培模式種植下應用廣泛，作為再生稻和蝦稻也表現良好。甬優4949種子需求量不斷增大，種子真實性對于品種來說是至關重要的。不同的水稻種子，檢測種子真實性的技術方法不盡相同，檢測甬優4949種子真實性需要選擇特定的檢測引物。目前還沒有公開甬優4949種子檢測的引物及方法。

發明內容

本發明的一個目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優點。

本發明還有一個目的是提供一種甬優4949種子純度檢測的SSR引物，利用引物對RM72對甬優4949種子進行檢測，產生的母本特異性條帶大小為180bp，產生的父本特異性條帶大小為150bp，子代同時兼有母本、父本特異性條帶；利用引物對RM224對甬優4949種子進行檢測，產生的母本特異性條帶大小為120bp，產生的父本特異性條帶大小為160bp，子代同時兼有母本、父本特異性條帶；通過特異性條帶可用來檢測甬優4949種子純度。

為了實現本發明的這些目的和其它優點，提供了一種甬優4949種子純度檢測的SSR引物，所述SSR引物包括引物對RM72或引物對RM224；

其中，引物對RM72包含：正向引物，其從5’端到3’為：CCGGCGATAAAACAATGAG，反向引物，其從5’端到3’為：GCATCGGTCCTAACTAAGGG；

引物對RM224包含：正向引物，其從5’端到3’為：ATCGATCGATCTTCACGAGG，反向引物，其5’端到3’為：TGCTATAAAAGGCATTCGGG。

本發明還提供了一種甬優4949種子純度檢測方法，包括以下步驟：

S1、提取待測甬優4949種子的DNA；

S2、以提取的DNA為模板，使用引物對RM72或引物對RM224進行PCR擴增，得到擴增產物；

S3、對S2中得到的擴增產物進行凝膠電泳檢測；

S4、根據電泳分離出來的條帶，只有同時具有親本特異條帶的單株才為真正的甬優4949種子，其中，引物對RM72產生的母本特異性條帶大小為180bp，產生的父本特異性條帶大小為150bp，引物對RM224產生的母本特異性條帶大小為120bp，產生的父本特異性條帶大小為160bp。

優選的是，所述的甬優4949種子純度檢測方法，S1中提取待測甬優4949種子的DNA具體包括：

A1、將待測種子置于離心管中，加入CTAB提取液，水浴；

A2、然后加入體積比為24:1的氯仿和異戊醇，混勻，離心，得到上清液，然后向上清液中加入異丙醇，混勻，離心，得到沉淀，洗滌，干燥后使用含有RNA酶的雙蒸水溶解，即得甬優4949種子的DNA。