[發明專利]一種基于RPA快速檢測水稻惡苗病菌藤倉鐮孢的方法

在審

• 申請號: 201910479869.1
• 申請日: 2019-06-04
• 公開（公告）號: CN110117592A
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 范在豐;馬文娣;田逸英;焦志遠;任彬元;楊普云;倪運東;李愛國
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 秦夢楠

1.引物對，由引物F和引物R組成；

所述引物F為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物R為如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子。

2.權利要求1所述的引物對的應用，為如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4):

(b1)鑒定或輔助鑒定待測病菌是否為藤倉鐮孢；

(b2)制備用于鑒定或輔助鑒定待測病菌是否為藤倉鐮孢的試劑盒；

(b3)檢測待測生物樣本中是否含有藤倉鐮孢；

(b4)制備用于檢測待測生物樣本中是否含有藤倉鐮孢的試劑盒。

3.含有權利要求1所述引物對的試劑盒；所述試劑盒的用途為如下(c1)或(c2)：

(c1)鑒定或輔助鑒定待測病菌是否為藤倉鐮孢；

(c2)檢測待測生物樣本中是否含有藤倉鐮孢。

4.權利要求3所述試劑盒的制備方法，包括將各條引物單獨包裝的步驟。

5.一種鑒定或輔助鑒定待測病菌是否為藤倉鐮孢的方法，包括如下步驟：

(1)提取待測病菌的總DNA；

(2)以步驟(1)提取的總DNA為模板，采用權利要求1所述的引物對進行重組酶聚合酶擴增，如果PCR擴增產物中含有184bp±5bp的DNA片段、待測病菌為或候選為藤倉鐮孢，如果PCR擴增產物中不含有184bp±5bp的DNA片段、待測病菌為或候選為非藤倉鐮孢。

6.一種鑒定或輔助鑒定待測病菌是否為藤倉鐮孢的方法，包括如下步驟：

檢測待測病菌的總DNA中是否含有特異DNA片段，如果含有特異DNA片段、待測病菌為或候選為藤倉鐮孢，如果不含有特異DNA片段、待測病菌為或候選為非藤倉鐮孢；

所述特異DNA片段為藤倉鐮孢的總DNA中權利要求1所述的引物對的靶序列。

7.一種檢測待測生物樣本中是否含有藤倉鐮孢的方法，包括如下步驟：

(1)提取待測生物樣本的總DNA；

(2)以步驟(1)提取的總DNA為模板，采用權利要求1所述的引物對進行重組酶聚合酶擴增，如果PCR擴增產物中含有184bp±5bp的DNA片段、待測生物樣本中含有或疑似含有藤倉鐮孢，如果PCR擴增產物中不含有184bp±5bp的DNA片段、待測生物樣本中不含有或疑似不含有藤倉鐮孢。

8.一種檢測待測生物樣本中是否含有藤倉鐮孢的方法，包括如下步驟：

檢測待測樣本的總DNA中是否含有特異DNA片段，如果含有特異DNA片段、待測生物樣本中含有或疑似含有藤倉鐮孢，如果不含有特異DNA片段、待測生物樣本中不含有或疑似不含有藤倉鐮孢；

所述特異DNA片段為藤倉鐮孢的總DNA中權利要求1所述引物對的靶序列。