[發明專利]一種檢測水稻上井岡霉素殘留的方法

在審

• 申請號: 201910473350.2
• 申請日: 2019-05-31
• 公開（公告）號: CN110274971A
• 公開（公告）日: 2019-09-24
• 發明（設計）人: 查欣欣
• 申請（專利權）人: 江蘇恒生檢測有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南京常青藤知識產權代理有限公司 32286
• 代理人: 金迪

1.一種檢測水稻上井岡霉素殘留的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1：樣品處理

田水樣品的處理：直接量取田水樣品溶液；

植株、稻殼樣品的處理：稱取2.5g植株樣品或稻殼樣品，置于50mL離心管中，加入15mL水浸潤后超聲60min，再加入10mL甲醇回旋震蕩提取60min，然后再在轉速4000r/min下，離心處理5min后吸取上層清液，重復上述步驟1-3次，合并上層清液得到植株或稻殼的樣品溶液；

土壤、糙米的處理：稱取5g土壤樣品或糙米樣品，置于50mL離心管中，然后加入15mL水浸潤后超聲60min，再加入10mL甲醇回旋震蕩提取60min，然后再在轉速4000r/min下，離心處理5min后，吸取上層清液，重復上述步驟1-3次，合并上層清液得到土壤或糙米的樣品溶液；

S2：樣品溶液濃縮

樣品溶液的濃縮：將各樣品溶液調節pH值為2-3，然后利用層析柱進行吸附收集，依次用pH3.5磷酸鹽緩沖溶液和乙醇淋洗去除雜質，再用洗脫劑進行洗脫，所得洗脫液利用旋轉蒸發儀濃縮近干，再用氮氣或空氣吹干，定量加入2mL的pH7.0磷酸氫二鈉-磷酸氫鉀緩沖溶液，超聲溶解得到各樣品濃縮液；

S3：檢測

田水的樣品濃縮液利用0.22μm親水性PTFE濾膜過濾后，利用高效液相色譜進行檢測；植株、稻殼、土壤或糙米的樣品濃縮液也利用0.22μm親水性PTFE濾膜過濾后，利用液相色譜質譜聯用進行檢測。

2.根據權利要求1的一種檢測水稻上井岡霉素殘留的方法，其特征在于，田水的樣品濃縮液利用高效液相色譜按照下述液相色譜條件進行檢測：島津LC-20AT液相色譜儀，配紫外檢測器(UVD)；色譜柱：ODS-SP(4.6×250mm 5μm)；流動相：0.005mol/L磷酸氫二鈉-磷酸和2％甲醇；流速：0.7mL/min；檢測波長：210nm；進樣量：20μL。

3.根據權利要求1的一種檢測水稻上井岡霉素殘留的方法，其特征在于，植株、稻殼、土壤和糙米的樣品濃縮液利用液相色譜質譜聯用按照下述待色譜條件和質譜條件進行檢測：

色譜條件：色譜柱：Waters ACQUITY UPLC R BEH C18，1.7μm，2.1mm×100mm；柱溫：40℃；流動相：A由溶液體積比為2:98水和甲醇的混合溶液、0.05％甲酸和5mmol/L的乙酸銨溶液組成，B由甲醇和0.05％甲酸組成，流動相采用梯度洗脫；流速：0.25mL/min，進樣量：5μL；

質譜條件：毛細管電壓：3.0kv；離子源溫度：150℃；錐孔反吹氣流量：50L/h；脫溶劑氣溫度：400℃；脫溶劑氣流量：800L/h；監測模式：MRM模式；電離方式：ESI⁺；母離子：498.3m/z；子離子：336.6m/z；錐孔電壓：30v；碰撞電壓：30v；駐留時間：0.050s。

4.根據權利要求3的一種檢測水稻上井岡霉素殘留的方法，其特征在于，色譜條件中的梯度條件分為四個階段，第一階段0-0.25min，流動相A和B的體積比為7:3；第二階段0.25-2min，流動相A和B的體積比為3:7；第三階段2-3min，流動相A和B的體積比為1:9；第四階段3-4min，流動相A和B的體積比為7:3。

5.根據權利要求1的一種檢測水稻上井岡霉素殘留的方法，其特征在于，S2步驟中的洗脫劑為1mol/L的氨水與乙醇的混合溶液，氨水與乙醇的體積比為4:1，洗脫速度為0.8mL/min。