[發明專利]一種應用臍帶間充質干細胞預防肝癌發生和生長的實驗方法

在審

• 申請號: 201910461488.0
• 申請日: 2019-05-30
• 公開（公告）號: CN110358726A
• 公開（公告）日: 2019-10-22
• 發明（設計）人: 盧君君;許蕊;馬潔;趙剛
• 申請（專利權）人: 天津市康婷生物工程集團有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12Q1/02
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

本發明涉及一種應用臍帶間充質干細胞預防肝癌發生和生長的實驗方法，首次提供了臍帶間充質干細胞預防肝癌發生和生長的應用，提供了UC?MSCs細胞制劑方法并提供了UC?MSCs細胞有效預防肝癌的劑量1×10⁴cells/療程和給藥方法的實驗數據，先移植UC?MSCs制劑，然后植入肝癌細胞，觀察并比較NOD/SCID小鼠腫瘤生長情況，從而證明臍帶間充質干細胞能夠起到預防肝癌發生和發展的方法以及UC?MSCs的使用劑量，最大限度的利用了UC?MSCs在生物體內成體器官組織的自我更新和損傷修復功能，從而提高機體免疫力，預防肝癌的發生，有利于其在后期研究和臨床應用中發揮更明顯穩定的作用。

技術領域

本發明屬于細胞學、免疫學領域，涉及干細胞技術，尤其是一種應用臍帶間充質干細胞預防肝癌發生和生長的實驗方法。

背景技術

間充質干細胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)是一類具有自我更新復制和多向分化潛能的未分化的細胞，在促進生物體內成體器官組織的自我更新和損傷修復過程中扮演著不可替代的重要角色。在各類不同種類的干細胞中，臍帶來源的間充質干細胞(Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,UC-MSCs)表現出更高的細胞增殖活性和分化潛能，同時UC-MSCs因不表達或低表達與組織相容相關的免疫分子，動物安全性評價不具成瘤性，因此受到越來越廣泛的關注。UC-MSCs優點還包括：取自新生兒，細胞質量不存在年齡因素的影響；取材容易，對母嬰無痛無害，無倫理障礙；細胞分離操作簡單，體外培養擴增效率更高，可以從同一來源短期內獲得足夠數量的、高質量、高純度的可用于臨床研究和治療的干細胞。

隨著UC-MSCs生物學特性研究的逐漸深入，其在臨床上的應用也日益廣泛。UC-MSCs免疫原性低，易于外源基因表達，且具有極好的靶向遷移能力和腫瘤趨向性，這些優勢使得UC-MSCs作為載體被逐步應用于多種惡性實體腫瘤生物治療的動物模型中。目前，有關外源性UC-MSCs究竟是促進還是抑制腫瘤生長的問題尚存爭議，各種體內、外實驗出現了完全不一致的結論。本發明轉換了實驗思路，采用提前回輸UC-MSCs細胞制劑，使其修復損傷或者病變的組織器官，從而提高機體免疫力，改善亞健康和預防癌癥的效果。本發明選擇肝癌為惡性腫瘤的代表，肝癌是我國癌癥發病率最高的腫瘤，吸煙或者生活壓力大都會增加肝癌患病率，現階段治療肝癌只能采用手術切除的辦法且治愈率較低。目前使用UC-MSCs細胞預防腫瘤的實驗不多，這是技術領域內的一項空白，所以UC-MSCs細胞預防肝癌是一項有意義的研究。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供一種先移植UC-MSCs制劑，然后植入肝癌細胞，觀察并比較NOD/SCID小鼠腫瘤生長情況，從而證明臍帶間充質干細胞能夠起到預防肝癌發生和發展的方法以及UC-MSCs的使用劑量，最大限度的利用了UC-MSCs在生物體內成體器官組織的自我更新和損傷修復功能，從而提高機體免疫力，預防肝癌的發生，有利于其在后期研究和臨床應用中發揮更明顯穩定的作用的應用臍帶間充質干細胞預防肝癌發生和生長的實驗方法。

本發明解決其技術問題是采取以下技術方案實現的：

一種應用臍帶間充質干細胞預防肝癌發生和生長的實驗方法，其特征在于：具體實驗步驟如下：

(1)選擇NOD/SCID小鼠，隨機將其分成生理鹽水組、UC-MSCs低劑量組和UC-MSCs高劑量組；

(2)選擇肝癌細胞HepG2：實驗前對HepG2細胞進行慢病毒轉染，使其帶RFP+Luciferse紅色熒光標記，轉染后使用1-2μg/mL嘌呤霉素進行篩選，直至純度達到90％以上，對穩轉的HepG2細胞擴增并凍存備用；

(3)采集目標：采集足月剖宮產胎兒臍帶，采集后6小時內在生物安全柜中分離傳代；

(4)培養至P3進行細胞制劑；