[發(fā)明專(zhuān)利]光化學(xué)誘導(dǎo)局灶性皮質(zhì)缺血腦卒中模型的建立方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910444887.6
• 申請(qǐng)日: 2019-05-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110215307A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李松林
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 溫州大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61D1/00
• 分類(lèi)號(hào): A61D1/00;A61N5/06
• 代理公司: 溫州名創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33258
• 代理人: 陳加利

本發(fā)明屬于動(dòng)物模型建立領(lǐng)域，具體涉及一種光化學(xué)誘導(dǎo)局灶性皮質(zhì)缺血腦卒中模型的建立方法，包括以下步驟：（1）給小鼠腹腔注射玫瑰紅B；（2）冷光源在大腦皮質(zhì)特定區(qū)域照射光化學(xué)反應(yīng)；（3）將光化學(xué)反應(yīng)處理后的小鼠放回繼續(xù)飼養(yǎng)，并進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。本發(fā)明利用光敏劑在特定強(qiáng)度光源的照射下發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，使血小板黏附于血管內(nèi)皮表面并發(fā)生釋放反應(yīng)，激發(fā)凝血過(guò)程，導(dǎo)致腦水腫和血小板微血栓、形成局灶性腦梗死的模型，具有無(wú)需開(kāi)顱、穩(wěn)定性好且易于復(fù)制的優(yōu)點(diǎn)，而且該模型具有人類(lèi)缺血性腦中風(fēng)疾病自發(fā)性但有限的功能恢復(fù)的特點(diǎn)。研究開(kāi)發(fā)更為符合人類(lèi)腦中風(fēng)的疾病的動(dòng)物模型具有重要的科學(xué)價(jià)值與現(xiàn)實(shí)意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動(dòng)物模型建立領(lǐng)域，具體涉及一種光化學(xué)誘導(dǎo)局灶性皮質(zhì)缺血腦卒中模型的建立方法。

背景技術(shù)

腦卒中是一種高死亡率和高致殘率的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,具有發(fā)病率高、并發(fā)癥多等特點(diǎn),其中缺血性腦中風(fēng)又占腦卒中的85%左右。 作為目前嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康最主要的疾病之一，腦中風(fēng)是成年人身體致殘的主要原因。腦卒中已經(jīng)成為影響我國(guó)人口健康水平和生活質(zhì)量，阻礙經(jīng)濟(jì)持續(xù)發(fā)展的重大社會(huì)問(wèn)題。

目前，現(xiàn)有制備腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ头椒ㄖ?，線栓法、開(kāi)顱電凝法以及微栓子栓塞法制備的局灶性腦缺血模型，存在或?qū)?dòng)物體重要求嚴(yán)格，或技術(shù)要求高，或與人類(lèi)腦卒中發(fā)病機(jī)制存在一定的差異，或需要開(kāi)顱，創(chuàng)傷性大等弱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)和不足，而提供一種光化學(xué)誘導(dǎo)局灶性皮質(zhì)缺血腦卒中模型的建立方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下：光化學(xué)誘導(dǎo)局灶性皮質(zhì)缺血腦卒中模型的建立方法，包括以下步驟：

（1）給小鼠腹腔右下腹部四分之一處注射玫瑰紅B；

（2）冷光源照射大腦皮質(zhì)特定區(qū)域（前囟外側(cè)1.5毫米）產(chǎn)生光化學(xué)反應(yīng)；

（3）將光化學(xué)反應(yīng)處理后的小鼠放回繼續(xù)飼養(yǎng)，并進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。

步驟（1）中，所選用的小鼠為3-4月齡成年健康雄性C57/B小鼠。

步驟（1）中，注射的玫瑰紅B為10g/l生理鹽水玫瑰紅B。

步驟（2）中，將異氟烷麻醉的小鼠置于立體定位裝置中，通過(guò)中線切口暴露顱骨，清除結(jié)締組織并干燥，然后進(jìn)行冷光源照射。

步驟（2）中，冷光源照射18分鐘。

步驟（3）中，神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分具體如下：?jiǎn)蚊で闆r下，分別在術(shù)后對(duì)動(dòng)物將進(jìn)行網(wǎng)格步行測(cè)試，圓筒實(shí)驗(yàn)和意式面條抓握試驗(yàn)的行為學(xué)評(píng)估，整個(gè)測(cè)試在卒中前一周至術(shù)后第1，3，5，7，11，15周完成。

本發(fā)明的有益效果如下：

1. 方法簡(jiǎn)單易行、且重復(fù)性高，其對(duì)動(dòng)脈內(nèi)皮損傷模擬了一種人類(lèi)缺血腦卒中的發(fā)病機(jī)制；

2. 動(dòng)物手術(shù)時(shí)間短、存活率高，目前生存時(shí)間最長(zhǎng)的腦卒中模型，因此可進(jìn)行腦卒中動(dòng)物長(zhǎng)期行為功能恢復(fù)的檢測(cè)；

3. 皮質(zhì)局灶性腦梗死區(qū)域的部位、程度、大小穩(wěn)定可靠；

4. 適用于大鼠和小鼠皮質(zhì)局灶腦缺血代謝、生化、生理及藥物治療學(xué)，包括腦中風(fēng)中醫(yī)藥長(zhǎng)期療效觀察等方面的研究；

5. 行為學(xué)評(píng)估采用經(jīng)典的網(wǎng)格步行測(cè)試、圓筒實(shí)驗(yàn)，以及現(xiàn)代的意式面條抓握檢測(cè)試驗(yàn)現(xiàn)結(jié)合的評(píng)估方法，制造模型效果評(píng)定可信性好，可反映局灶皮質(zhì)缺血性腦中風(fēng)有限的自發(fā)性功能恢復(fù)的特點(diǎn)。