[發(fā)明專利]一種制備細(xì)胞塊的方法及用于制作細(xì)胞塊的試劑盒

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• 申請日: 2019-05-24
• 公開（公告）號: CN110079517A
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈世軍;姚宇琪
• 申請（專利權(quán)）人: 四川省腫瘤醫(yī)院
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12M1/00;C12M1/24
• 代理公司: 北京市領(lǐng)專知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11590
• 代理人: 代平

本發(fā)明涉及一種制備細(xì)胞塊的方法及用于制作細(xì)胞塊的試劑盒，其中，所述制備細(xì)胞塊的方法，采用海藻酸鈉溶液和氯化鈣溶液作為將缺乏粘附性的松散細(xì)胞樣本網(wǎng)羅聚集起來的凝固劑；本方法制備細(xì)胞塊，過程簡單、操作簡便，整個(gè)制備過程，不僅無異源性蛋白成分，減少后續(xù)免疫染色時(shí)的非特異性著色，而且在常溫下即可進(jìn)行，無需額外進(jìn)行加熱、溫度控制等操作，避免高溫對細(xì)胞的影響；此外，用于制備細(xì)胞塊的海藻酸鈉溶液和氯化鈣溶液成本低，且可以長期保存，兩種溶液混合后會在短時(shí)間內(nèi)形成固態(tài)，可以將松散的細(xì)胞網(wǎng)羅起來凝聚成團(tuán)，大大方便了細(xì)胞塊的制作。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞塊技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種制備細(xì)胞塊的方法及用于制作細(xì)胞塊的試劑盒。

背景技術(shù)

細(xì)胞病理學(xué)主要用于在取得的細(xì)胞樣本中查找腫瘤細(xì)胞等目標(biāo)細(xì)胞，以達(dá)到病理診斷目的。細(xì)胞塊技術(shù)是細(xì)胞病理學(xué)的一項(xiàng)重要技術(shù)，是指利用各種方法將缺乏粘附的松散細(xì)胞網(wǎng)羅聚集，形成細(xì)胞塊(類似組織塊)，然后進(jìn)行脫水、包埋、切片，進(jìn)而可以行免疫細(xì)胞化學(xué)染色、分子檢測等一系列后續(xù)實(shí)驗(yàn)，以達(dá)到對細(xì)胞樣本的長久保存、精準(zhǔn)檢測以及指導(dǎo)臨床靶向治療的目的。

與組織病理學(xué)相比，細(xì)胞學(xué)取樣更加方便快捷，以其微創(chuàng)、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用等優(yōu)勢，在病理診斷方面發(fā)揮不可替代的作用。但之前的細(xì)胞學(xué)樣本僅能做成涂片，不能富集成細(xì)胞塊，進(jìn)行包埋切片，無法發(fā)揮細(xì)胞學(xué)取樣便捷的優(yōu)勢，大大限制了細(xì)胞學(xué)的發(fā)展。近幾年，隨著細(xì)胞塊技術(shù)的開發(fā)及發(fā)展，利用細(xì)胞學(xué)樣本制作細(xì)胞塊成為細(xì)胞學(xué)熱點(diǎn)技術(shù)，凝聚形成的細(xì)胞塊可以同組織樣本一樣進(jìn)行處理，在發(fā)揮細(xì)胞學(xué)取樣優(yōu)勢的同時(shí)，可以進(jìn)行更多的后續(xù)實(shí)驗(yàn)，提高診斷精準(zhǔn)性，并且可以將細(xì)胞塊樣本進(jìn)行分子檢測，為臨床靶向治療提供依據(jù)。

細(xì)胞塊制作的關(guān)鍵是如何將松散細(xì)胞凝聚包裹起來，現(xiàn)有技術(shù)中，細(xì)胞塊制作常用的細(xì)胞凝聚物質(zhì)有瓊脂、蛋清、血漿及凝血酶、腸衣(取自豬腸的腸纖維膜)等，采用這些物質(zhì)制作細(xì)胞塊，通常存在一些不足：1、細(xì)胞塊的制備過程繁瑣(即使得細(xì)胞凝聚成塊的過程繁瑣)，例如，在中國專利CN108303295A所公開的一種細(xì)胞塊制備方法，采用瓊脂作為凝固劑，由于瓊脂通常為固體，在使用時(shí)，需要先將瓊脂加熱融化，然后等熔融狀態(tài)的瓊脂降低到合適的溫度后，才能加入細(xì)胞樣本中，最后使其自然冷卻，獲得凝固后的細(xì)胞塊；此過程，不僅操作麻煩，而且還需要合理的控制瓊脂的溫度；

2、細(xì)胞塊的制備過程耗時(shí)長；

3、成本較高，使用量大，例如采用血漿凝血酶法制作細(xì)胞塊，成本通常較高；

4、利用生物源性物質(zhì)包埋細(xì)胞樣本獲得細(xì)胞塊，效果不穩(wěn)定，并且切片后背景著色重，例如，采用蛋清制備的細(xì)胞塊，后期使用過程中易染色，增加無效背景影響檢測結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于改善現(xiàn)有技術(shù)中，細(xì)胞塊制備過程中存在的制備過程繁瑣、耗時(shí)長、成本較高、效果不穩(wěn)定等不足，提供了一種制備細(xì)胞塊的方法，本方法采用海藻酸鈉溶液和氯化鈣溶液作為將缺乏粘附性的松散細(xì)胞樣本網(wǎng)羅聚集起來的凝固劑。海藻酸鈉溶液和氯化鈣溶液是現(xiàn)有技術(shù)中常見的化學(xué)用品，無毒無害，且價(jià)格低廉，采用海藻酸鈉溶液和氯化鈣溶液作為凝聚細(xì)胞樣本的凝固劑，不僅能將細(xì)胞樣本中松散的細(xì)胞凝聚、包裹，并形成細(xì)胞塊，而且還具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1、制備細(xì)胞塊的過程簡單、且耗時(shí)短，既可以大大簡化操作，又可以大大縮短制備細(xì)胞塊的操作時(shí)間；

2、整個(gè)制備過程，無異源性蛋白成分，使得細(xì)胞塊的效果穩(wěn)定，減少后續(xù)免疫染色時(shí)的非特異性著色；

3、整個(gè)制備過程，在常溫下進(jìn)行，無需額外進(jìn)行加熱、溫度控制等操作，既可以簡化操作，又可以有效避免高溫對細(xì)胞的影響；

4、用于制備細(xì)胞塊的海藻酸鈉溶液和氯化鈣溶液可以長期保存，而且兩種溶液混合后會在短時(shí)間內(nèi)形成固態(tài)，可以將松散的細(xì)胞網(wǎng)羅起來凝聚成團(tuán)，有利于大大縮短制備細(xì)胞塊所需的時(shí)間。