[發(fā)明專利]與西瓜短蔓基因Cldw1共分離的分子標(biāo)記

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910434493.2
• 申請日: 2019-05-23
• 公開（公告）號: CN110157831B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊路明;孫守如;朱華玉;馬長生;楊森;胡建斌;劉東明;張敏娟
• 申請（專利權(quán)）人: 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時立新

1.一種用于檢測西瓜莖蔓長度性狀的引物對，其特征在于，該引物對具體為：

dCAPS3-F: 5’-TATGCTTATACTCTCACTGGAATT-3’，

dCAPS3-R: 5’-TTAACATTGCAGCCAAAAATAG-3’；

利用該引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增時：

當(dāng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物僅有一條如SEQ ID NO .1所示的長度為120 bp的特征條帶時，待測西瓜為短蔓性狀品種；

當(dāng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物僅有一條如SEQ ID NO.2所示的長度為121 bp的特征條帶時，待測西瓜為純合長蔓性狀品種；

當(dāng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物既有一條如SEQ ID NO.2所示的長度為121 bp的特征條帶，又有一條如SEQ ID NO .1所示的長度為120 bp的特征條帶時，待測西瓜為雜合長蔓性狀品種。

2.權(quán)利要求1所述檢測西瓜莖蔓長度性狀的引物對在西瓜莖蔓長度性狀判定中的應(yīng)用，其特征在于，利用該引物對的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物來檢測判定西瓜莖蔓長度性狀；具體判定時：

當(dāng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物僅有一條如SEQ ID NO .1所示的長度為120 bp的特征條帶時，待測西瓜為短蔓性狀品種；同時，該P(yáng)CR擴(kuò)增產(chǎn)物被EcoR1酶切后，酶切產(chǎn)物中包含一個100bp長度片段；

當(dāng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物僅有一條如SEQ ID NO.2所示的長度為121 bp的特征條帶時，待測西瓜為純合長蔓性狀品種；同時，該P(yáng)CR擴(kuò)增產(chǎn)物不能被EcoR1酶切；

當(dāng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物既有一條如SEQ ID NO.2所示的長度為121 bp的特征條帶，又有一條如SEQ ID NO .1所示的長度為120 bp的特征條帶時，待測西瓜為雜合長蔓性狀品種；同時，如SEQ ID NO .1所示的長度為120 bp的特征條帶被EcoR1酶切后，酶切產(chǎn)物中包含一個100bp長度片段。

3.利用權(quán)利要求1所述檢測西瓜莖蔓長度性狀的引物對的西瓜莖蔓長度性狀的檢測判定方法，其特征在于，采用PCR擴(kuò)增方法檢測判定，具體包括如下步驟：

（1）提取待測西瓜品種基因組DNA；

（2）以步驟（1）中所提取基因組DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測和測序、以及進(jìn)行EcoR1酶切并對酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳；

（3）依據(jù)步驟（2）的電泳條帶和測序、及酶切結(jié)果進(jìn)行判定，具體判定標(biāo)準(zhǔn)為：

當(dāng)待測西瓜品種為短蔓性狀品種，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物僅有一條長度為120 bp的特征條帶，該120bp的特征條帶的具體堿基序列如SEQ ID NO.1所示；PCR擴(kuò)增產(chǎn)物被EcoR1酶切后，酶切產(chǎn)物中包含一個100bp長度片段；

當(dāng)待測西瓜品種為長蔓性狀品種，則有兩種情況：

當(dāng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中僅有一條長度為121 bp的特征條帶時，該品種為純合長蔓性狀品種，該121bp的特征條帶的具體堿基序列如SEQ ID NO.2所示；該P(yáng)CR產(chǎn)物不能被EcoR1酶切；

當(dāng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中既有一條長度為121 bp的特征條帶，又有一條長度為120 bp的特征條帶時，表明該長蔓性狀品種為雜合長蔓性狀品種。

4.如權(quán)利要求3所述的西瓜莖蔓長度性狀的檢測判定方法，其特征在于，步驟（1）中，采用CTAB法提取其基因組DNA。

5.如權(quán)利要求3所述的西瓜莖蔓長度性狀的檢測判定方法，其特征在于，步驟（2）中，PCR擴(kuò)展時，PCR擴(kuò)增時，10μL擴(kuò)增體系設(shè)計(jì)如下：

基因組DNA，1μL；

dCAPS3-F，0.5μL；

dCAPS3-R，0.5μL；

PCR MagicMix，5.0μL；

ddH₂O ，3.0μL；

PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃、5min；94℃、30s，55℃、30s，72℃、30s，35個循環(huán)；72℃、5min。

6.如權(quán)利要求3所述的西瓜莖蔓長度性狀的檢測判定方法，其特征在于，步驟（2）中，EcoR1酶切時， 10μL酶切體系設(shè)計(jì)如下：

PCR產(chǎn)物，2μL；

10×Buffer EcoR1，1μL；

EcoR1，1μL；

ddH₂O，6μL；

37℃酶切10h。